Giardia duodenum ਇੱਕ ਪਰਜੀਵੀ ਜੀਵ ਹੈ ਜੋ giardiasis ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੀ ਲਾਗ ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਸਤ ਦੇ ਕਲੀਨਿਕਲ ਸੰਕੇਤਾਂ ਵਾਲੇ ਛੋਟੇ ਬੱਚਿਆਂ ਵਿੱਚ ਆਮ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਹੈ ਕਿ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ G. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ-ਵਰਗੇ ਰੀਸੈਪਟਰ 3 (NLRP3) ਬਾਈਡਿੰਗ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਐਕਸਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਵੇਸਿਕਲ (EV) secretion ਦੁਆਰਾ ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਜਰਾਸੀਮ-ਸਬੰਧਤ ਡੂਓਡੇਨੋਕੋਕਲ EV (GEV) ਦੇ ਸਹੀ ਅਣੂ ਪੈਟਰਨ ਅਤੇ giardiasis ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨਾ ਬਾਕੀ ਹੈ।
GEV ਵਿੱਚ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਅਤੇ alpha-7.3 giardins ਦਾ ਨਿਰਮਾਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਮਾਊਸ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਟੀਚੇ ਦੇ ਅਣੂ ਕੈਸਪੇਸ -1 ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।p20 ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।.G. duodenalis alpha-2 ਅਤੇ alpha-7.3 giardines ਅਸਲ ਵਿੱਚ NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 ਅਤੇ caspase-1 p20), IL secretion ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਸਨ।1β ਪੱਧਰ, ਅਪੋਪਟੋਟਿਕ ਸਪੌਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਏਐਸਸੀ) ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਪੱਧਰ, ਅਤੇ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਅਤੇ ਏਐਸਸੀ ਦਾ ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਥਾਨੀਕਰਨ।G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਫਿਰ ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ NLRP3 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਬਲੌਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (NLRP3 ਬਲੌਕਡ ਮਾਊਸ) ਅਤੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ ਵਿੱਚ ਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਤਬਦੀਲੀਆਂ, ਡੂਓਡੇਨਲ ਪਰਜੀਵੀ ਲੋਡ, ਅਤੇ ਡੂਓਡੇਨਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਹਾਈਰਡਾਈਨਜ਼ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਰਾਹੀਂ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ IL-1β secretion ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮ ਵਿੱਚ ਇਹਨਾਂ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡਾਈਨਜ਼ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਨਾਲ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1 ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ, NLRP3, ਪ੍ਰੋ-IL-1β, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋ-ਕੈਸਪੇਸ-1 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ, IL-1β secretion ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ, ASA ਚਟਾਕ ਦਾ ਗਠਨ। cytoplasm, ਅਤੇ ASA oligomerization ਦੀ ਸ਼ਮੂਲੀਅਤ.NLRP3 ਸੋਜਸ਼ ਲਿੰਗ ਦਾ ਨੁਕਸਾਨ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।NLRP3-ਬਲਾਕ ਕੀਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਤੋਂ ਗੈਵੇਜ ਦੁਆਰਾ ਸਿਸਟਾਂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਚੂਹਿਆਂ ਨੇ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਵੱਧਦੀ ਗਿਣਤੀ ਅਤੇ ਡੂਓਡੇਨਲ ਵਿਲੀ ਨੂੰ ਗੰਭੀਰ ਨੁਕਸਾਨ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ, ਸੁੰਗੜਨ ਅਤੇ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਨੇਕਰੋਟਿਕ ਕ੍ਰਿਪਟਸ ਦੁਆਰਾ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ।ਵਿਵੋ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ ਗਿਅਰਡਾਈਨਜ਼ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਰਾਹੀਂ IL-1β ਦੇ secretion ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ giardines ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਨਾਲ ਇਮਯੂਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਨੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮਤਾ ਘਟਾ ਦਿੱਤੀ ਹੈ।
ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ, ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਗਿਅਰਡੀਆ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਮੇਜ਼ਬਾਨ NLRP3 ਸੋਜਸ਼ ਨੂੰ ਉੱਚਾ ਚੁੱਕਣ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ G. duodenalis ਦੀ ਸੰਕਰਮਣਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ giardiasis ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਟੀਚੇ ਹਨ।
Giardia duodenum ਇੱਕ ਐਕਸਟਰਸੈਲਿਊਲਰ ਪ੍ਰੋਟੋਜ਼ੋਆਨ ਪਰਜੀਵੀ ਹੈ ਜੋ ਛੋਟੀ ਆਂਦਰ ਵਿੱਚ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹਰ ਸਾਲ ਦਸਤ ਦੇ ਨਾਲ ਗਿਅਰਡੀਆਸਿਸ ਦੇ 280 ਮਿਲੀਅਨ ਕੇਸਾਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਵਿਕਾਸਸ਼ੀਲ ਦੇਸ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਛੋਟੇ ਬੱਚਿਆਂ ਵਿੱਚ [1]।M. duodenum cysts ਨਾਲ ਦੂਸ਼ਿਤ ਪਾਣੀ ਜਾਂ ਭੋਜਨ ਪੀਣ ਨਾਲ ਲੋਕ ਸੰਕਰਮਿਤ ਹੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਫਿਰ ਪੇਟ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਗੈਸਟਿਕ ਜੂਸ ਵਿੱਚ ਬਾਹਰ ਨਿਕਲ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।Giardia duodenum trophozoites duodenal epithelium ਨਾਲ ਜੁੜਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਮਤਲੀ, ਉਲਟੀਆਂ, ਦਸਤ, ਪੇਟ ਵਿੱਚ ਦਰਦ, ਅਤੇ ਭਾਰ ਘਟਦਾ ਹੈ।ਇਮਯੂਨੋਡਫੀਸ਼ੈਂਸੀ ਅਤੇ ਸਿਸਟਿਕ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਾਲੇ ਵਿਅਕਤੀ ਲਾਗ ਲਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਲਾਗ ਓਰਲ ਅਤੇ ਗੁਦਾ ਸੈਕਸ ਦੁਆਰਾ ਵੀ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ [2]।ਮੈਟ੍ਰੋਨੀਡਾਜ਼ੋਲ, ਟਿਨੀਡਾਜ਼ੋਲ, ਅਤੇ ਨਿਟਾਜ਼ਾਕਸਾਨਾਈਡ ਵਰਗੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ ਡਿਊਡੀਨਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨਾਂ [3] ਲਈ ਤਰਜੀਹੀ ਇਲਾਜ ਵਿਕਲਪ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਕੀਮੋਥੈਰੇਪੀ ਦਵਾਈਆਂ ਉਲਟ ਮਾੜੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੀਆਂ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮਤਲੀ, ਕਾਰਸੀਨੋਜਨੇਸਿਸ, ਅਤੇ ਜੀਨੋਟੌਕਸਿਟੀ [4]।ਇਸ ਲਈ, G. duodenalis ਦੀ ਲਾਗ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਵਿਕਸਿਤ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।
ਇਨਫਲਾਮਾਸੋਮ ਸਾਇਟੋਸੋਲਿਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕੰਪਲੈਕਸਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਜਨਮ ਤੋਂ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਹਨ, ਜਰਾਸੀਮ ਦੇ ਹਮਲੇ ਤੋਂ ਬਚਾਅ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ [5] ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਹਨਾਂ ਇਨਫਲਾਮਾਸੋਮਜ਼ ਵਿੱਚ, ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ-ਬਾਈਡਿੰਗ ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ (NOD) ਰੀਸੈਪਟਰ 3 (NLRP3) ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ-ਬਾਈਡਿੰਗ ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ (NLRP3) ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ-ਬਾਈਡਿੰਗ-ਵਰਗੇ ਇਨਫਲਾਮਾਸੋਮ ਦਾ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜਰਾਸੀਮ/ਪੈਥੋਜਨ/ਡੈਮੇਜ ਪੈਟਰਨ ਦੁਆਰਾ ਖੋਜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। DAMP), ਕੁਦਰਤੀ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਪਛਾਣਦਾ ਹੈ, ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਭੜਕਾਊ ਬਿਮਾਰੀਆਂ [6,7,8] ਵਿੱਚ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਹੋਮਿਓਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਵਿੱਚ ਪੈਟਰਨ ਰਿਕਗਨੀਸ਼ਨ ਰੀਸੈਪਟਰ (PRR) NLRP3, ਇੱਕ ਅਡੈਪਟਰ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਸਪੌਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਏਐਸਸੀ), ਅਤੇ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਕ ਪ੍ਰੋਕੈਸਪੇਸ-1 ਜਾਂ ਪ੍ਰੋਕਾਸਪੇਸ-11 ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਜਰਾਸੀਮ ਦੇ ਹਮਲੇ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਇੱਕ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਨਿਓਸਪੋਰਾ ਕੈਨਿਨਮ [9], ਪੈਰਾਕੋਸੀਡੀਓਇਡਜ਼ ਬ੍ਰਾਸੀਲੀਏਨਸਿਸ [10], ਅਤੇ ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।[11], ਪਰ ਇਹ ਵੀ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਕੀੜੇ [12] ਵਿੱਚ।ਸਾਡੀਆਂ ਪਿਛਲੀਆਂ ਖੋਜਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਹੈ ਕਿ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ NLRP3 ਸੋਜਸ਼ ਦੇ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਵੇਸਿਕਲਸ (EVs) [13] ਨੂੰ ਛੁਪਾਉਣ ਦੁਆਰਾ ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, Vivo ਵਿੱਚ G. duodenalis ਦੀ ਲਾਗ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨਾ ਬਾਕੀ ਹੈ।
Giardins ਨੂੰ ਅਸਲ ਵਿੱਚ G. duodenalis cytoskeleton ਦੇ ਢਾਂਚਾਗਤ ਭਾਗਾਂ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਛੋਟੀ ਆਂਦਰ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਐਪੀਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲ ਅਟੈਚਮੈਂਟ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਢਾਲਣ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਜਰਾਸੀਮਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ, G. duodenalis trophozoites ਨੇ ਇੱਕ ਵਿਲੱਖਣ ਸਾਇਟੋਸਕੇਲੇਟਲ ਬਣਤਰ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 8 ਫਲੈਜੇਲਾ, 1 ਮੱਧ ਸਰੀਰ, ਅਤੇ 1 ਵੈਂਟ੍ਰਲ ਡਿਸਕ [14] ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।Giardia duodenum ਦੇ trophozoites ਆਪਣੇ cytoskeleton ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਉੱਪਰਲੀ ਛੋਟੀ ਆਂਦਰ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ duodenum ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਐਂਟਰੋਸਾਇਟਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਉਹ ਲਗਾਤਾਰ ਮਾਈਗਰੇਟ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਐਪੀਥੈਲਿਅਲ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਸਲਈ, ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਸਾਇਟੋਸਕਲੇਟਨ ਅਤੇ ਵਾਇਰਲੈਂਸ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਨਜ਼ਦੀਕੀ ਸਬੰਧ ਹੈ.ਗਿਅਰਡੀਆ ਡੂਓਡੇਨਮ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਗਿਅਰਡਾਈਨ ਸਾਇਟੋਸਕਲੇਟਨ ਬਣਤਰ [15] ਦੇ ਹਿੱਸੇ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹਨਾਂ ਨੂੰ ਚਾਰ ਸ਼੍ਰੇਣੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ: α-, β-, γ-, ਅਤੇ δ-giardines।α-giardin ਪਰਿਵਾਰ ਦੇ 21 ਮੈਂਬਰ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਸਾਰੇ ਫਾਸਫੋਲਿਪੀਡਜ਼ [16] ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹਣ ਦੀ ਕੈਲਸ਼ੀਅਮ-ਨਿਰਭਰ ਸਮਰੱਥਾ ਰੱਖਦੇ ਹਨ।ਉਹ ਸਾਇਟੋਸਕਲੇਟਨ ਨੂੰ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਨਾਲ ਵੀ ਜੋੜਦੇ ਹਨ।G. duodenalis ਦੇ ਕਾਰਨ ਦਸਤ ਵਾਲੇ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, α-giardins ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਗਟ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਲਾਗ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਇਮਿਊਨੋਰਐਕਟਿਵ ਹੁੰਦੇ ਹਨ [17]।Giardia alfa-1 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹੈਟਰੋਲੋਗਸ ਵੈਕਸੀਨ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ giardiasis ਤੋਂ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਹਨ ਅਤੇ ਵੈਕਸੀਨ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਸੰਭਾਵੀ ਉਮੀਦਵਾਰ ਐਂਟੀਜੇਨ ਹਨ [18]।ਅਲਫ਼ਾ-8 ਗਿਅਰਡਿਨ, ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਝਿੱਲੀ ਅਤੇ ਫਲੈਗਲਾ ਵਿੱਚ ਸਥਾਨਿਕ, ਪਰ ਵੈਂਟ੍ਰਲ ਡਿਸਕ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ, ਜੀ ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ [19] ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਦਰ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਅਲਫ਼ਾ-14 ਗਿਯਾਰਡਿਨ ਫਲੈਗਲਾ ਉੱਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਟਿਊਬਿਊਲ ਬਣਤਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਜੀ ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ [20] ਦੀ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਅਲਫ਼ਾ-11 ਗਿਆਰਡੀਨ ਪੂਰੇ ਜੀਵਨ ਚੱਕਰ ਦੌਰਾਨ ਭਰਪੂਰ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-11 ਗਿਆਰਡੀਨ ਦੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਮਾਤਰਾ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾਉਂਦੀ ਹੈ [21]।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਅਸਪਸ਼ਟ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡੀਨ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਦੀ ਲਾਗ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਅੰਤਰੀਵ ਤੰਤਰ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਸੁਰੱਖਿਆ ਹਨ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਮੇਜ਼ਬਾਨ NLRP3 ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ਨੂੰ ਮਾਊਸ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਰ ਜਲਣਸ਼ੀਲ ਟੀਚਿਆਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ।ਅਸੀਂ G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮਤਾ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਵੀ ਕੀਤਾ, ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7,3 ਗਿਅਰਡਾਈਨਜ਼ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ ਕਿ ਜਰਾਸੀਮ ਦੀ ਜਰਾਸੀਮ ਵਿੱਚ ਇਹ ਦੋ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਹਨ G. duodenalis.ਸਾਡਾ ਸਾਂਝਾ ਟੀਚਾ G. duodenalis ਦੀ ਲਾਗ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਲਈ ਹੋਨਹਾਰ ਟੀਚਿਆਂ ਨੂੰ ਵਿਕਸਿਤ ਕਰਨਾ ਸੀ।
ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ (WT) C57BL/6 ਮਾਦਾ ਚੂਹੇ 5-8 ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਦੀ ਉਮਰ ਦੇ ਲਿਓਨਿੰਗ ਚਾਂਗਸ਼ੇਂਗ ਐਕਸਪੈਰੀਮੈਂਟਲ ਐਨੀਮਲ ਸੈਂਟਰ (ਲਿਓਨਿੰਗ, ਚੀਨ) ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ।ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਪਾਣੀ ਤੱਕ ਮੁਫਤ ਪਹੁੰਚ ਸੀ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਰੋਗਾਣੂ ਰਹਿਤ ਭੋਜਨ ਮਿਲਿਆ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ 12/12 ਘੰਟੇ ਦੇ ਰੋਸ਼ਨੀ/ਹਨੇਰੇ ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ।ਲਾਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਐਮਪੀਸਿਲਿਨ (1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਐਮਐਲ), ਵੈਨਕੋਮਾਈਸਿਨ (1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਐਮਐਲ), ਅਤੇ ਨਿਓਮਾਈਸਿਨ (1.4 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਐਮਐਲ) (ਸਾਰੇ ਸ਼ੰਘਾਈ, ਚੀਨ, ਨਕਲੀ ਜੀਵਾਂ ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ) [22] ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਪੀਣ ਵਾਲੇ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕਸ ਐਡ ਲਿਬਿਟਮ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ]।]।ਉਹ ਚੂਹੇ ਜੋ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਖਾਣ-ਪੀਣ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਗੁਆ ਚੁੱਕੇ ਹਨ ਅਤੇ ≥ 20% ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ ਗੁਆ ਚੁੱਕੇ ਹਨ, ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਸਰਵਾਈਕਲ ਡਿਸਲੋਕੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਮਨੁੱਖੀ ਤੌਰ 'ਤੇ euthanized ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
WB G. duodenalis trophozoites (ਅਮਰੀਕਨ ਟਾਈਪ ਕਲਚਰ ਕਲੈਕਸ਼ਨ, ਮਾਨਸਾਸ, USA) ਨੂੰ 12.5% ​​ਭਰੂਣ ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ (FBS; ਹਰ ਗ੍ਰੀਨ, Zhejiang, China) ਅਤੇ 0.1% ਬੋਵਾਈਨ ਬਾਇਲ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਮਿਸੌਰੀ, ਯੂਐਸਏ) ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ).ਯੂਐਸਏ) ਮਾਈਕ੍ਰੋਏਰੋਬਿਕ ਹਾਲਤਾਂ ਅਧੀਨ.ਕੰਫਲੂਐਂਟ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਅੱਗੇ ਪ੍ਰਜਨਨ ਲਈ 1:4 ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਪਾਸ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
Giardia duodenum cysts ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ [23], ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਕਟਾਈ ਲਘੂਗਣਕ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਇੰਡਿਊਸਿੰਗ ਮਾਧਿਅਮ, pH 7.1 (ਸੋਧਿਆ TYI-S-33) ਨਾਲ 1 × 106 ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਲਈ ਪੇਤਲੀ ਪੈ ਗਈ ਸੀ।ਬਾਇਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 0.05% ਮੱਧਮ).ਟਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਅਨੈਰੋਬਿਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਲਘੂਗਣਕ ਵਿਕਾਸ ਪੜਾਅ ਤੱਕ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਸਿਸਟ ਇੰਡਿਊਸਿੰਗ ਮਾਧਿਅਮ (pH 7.8; ਸੋਧਿਆ TYI-S-33 ਮਾਧਿਅਮ 1% ਬਾਇਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ) ਅਤੇ ਕਲਚਰ G. duodenalis ਨੂੰ 48-96 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 37°C 'ਤੇ ਬਦਲੋ, ਜਿਸ ਦੌਰਾਨ ਗੱਠਿਆਂ ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਸਿਸਟ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਕਲਚਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਕਟਾਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਬਾਕੀ ਬਚੇ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਲਾਈਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਨਿਰਜੀਵ ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਗੈਸਟਿਕ ਟਿਊਬ ਰਾਹੀਂ ਬਾਅਦ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਲਈ ਸਿਸਟਾਂ ਨੂੰ ਗਿਣਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
Giardia extracellular vesicles (GEVs) ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ [13] ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਭਰਪੂਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਲਘੂਗਣਕ ਵਿਕਾਸ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਐਕਸੋਸੋਮ-ਡੈਪਲੀਟਿਡ FBS (ਬਾਇਓਲੋਜੀਕਲ ਇੰਡਸਟਰੀਜ਼, ਬੀਟ-ਹੇਮੇਕ, ਇਜ਼ਰਾਈਲ) ਦੇ ਨਾਲ ਤਿਆਰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ TYI-S-33 ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 1 × 106 ਪਰਜੀਵੀ/mL ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਸਸਪੈਂਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 12 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।10 ਮਿੰਟ ਲਈ 2000 ਗ੍ਰਾਮ, 45 ਮਿੰਟ ਲਈ 10,000 ਗ੍ਰਾਮ, ਅਤੇ 60 ਮਿੰਟ ਲਈ 100,000 ਗ੍ਰਾਮ 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਕਲਚਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰਡ ਖਾਰੇ (ਪੀ.ਬੀ.ਐਸ.) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੀਸਿਪੀਟੇਟਸ ਨੂੰ ਭੰਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇੱਕ BCA ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਐਸੇ ਕਿੱਟ (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਵਾਲਥਮ, MA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ -80° C. 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਾਂ ਹੋਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਸਿੱਧਾ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਾਊਸ ਪੈਰੀਟੋਨਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ [24]।ਸੰਖੇਪ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਚੂਹਿਆਂ (6-8 ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਦੀ ਉਮਰ ਦੇ) ਨੂੰ 2.98% ਡਿਫਕੋ ਤਰਲ ਥਿਓਗਲਾਈਕੋਲ ਮਾਧਿਅਮ (ਬੀਡੀ, ਫਰੈਂਕਲਿਨ ਲੇਕਸ, ਐਨਜੇ, ਯੂਐਸਏ) ਦੇ 2.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਦੇ ਨਾਲ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 3-4 ਤਾਲੂ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਯੁਥਨੇਸੀਆ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਪੇਟ ਦੇ ਖੋਲ ਤੋਂ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਦਾ ਇੱਕ ਮੁਅੱਤਲ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ 1000 ਗ੍ਰਾਮ 'ਤੇ 3 ਵਾਰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਟਾਈ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ CD11b ਮਾਰਕਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਦੁਆਰਾ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਸੈੱਲ ਸ਼ੁੱਧਤਾ > 98% ਨਹੀਂ ਸੀ, ਫਿਰ 6-ਵੈਲ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟਾਂ (4.5 x 106 ਸੈੱਲ/ਖੂਹ) ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 37° C 'ਤੇ 10% FBS (ਬਾਇਓਇੰਡਸਟਰੀ) ਨਾਲ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਅਤੇ 5% CO2।
RNA ਨੂੰ TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, China) ਦੇ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਵਿੱਚ 1 × 107 ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਤੋਂ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਮੋਨਸਕ੍ਰਿਪਟ dsDNase (ਮੋਨਾਡ, ਵੁਹਾਨ, ਚੀਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕੁੱਲ G. duodenalis RNA ਤੋਂ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਡੀਐਨਏ (ਸੀਡੀਐਨਏ) ਨੂੰ ਸਮਕਾਲੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਮੋਨਸਕ੍ਰਿਪਟ RTIIII ਸੁਪਰ ਮਿਕਸ (ਮੋਨਾਡ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨਾ।
ਟੀਚਾ G. duodenalis ਜੀਨ ਲਈ CDS ਕ੍ਰਮ ਜਾਣਕਾਰੀ NCBI GenBank ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਹਰੇਕ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਲਈ ਖਾਸ ਸਹਿਜ ਕਲੋਨਿੰਗ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 5.0 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।ਫਾਰਵਰਡ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (5′-3′) ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ ਭਾਗ ਹੁੰਦੇ ਹਨ: ਇੱਕ ਰੇਖਾਬੱਧ ਵੈਕਟਰ pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ਨਾਲ ਇੱਕ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਕੋਡਨ ATG ਅਤੇ GNN ਸ਼ੁਰੂ ਕਰੋ (ਜੇ ਪਹਿਲਾ ਅਧਾਰ G ਨਹੀਂ ਹੈ)।ਇਹ ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 16 bp ਸੰਯੁਕਤ ਆਧਾਰ (GC ਸਮੱਗਰੀ 40–60%/Tm ਲਗਭਗ 55 °C)।ਰਿਵਰਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (5′-3′) ਵਿੱਚ ਦੋ ਹਿੱਸੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਇੱਕ EcoRV-ਲੀਨੀਅਰਾਈਜ਼ਡ ਵੈਕਟਰ pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਕ੍ਰਮ ਅਤੇ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 16 bp ਦਾ ਸੰਯੁਕਤ ਅਧਾਰ।(ਆਖਰੀ ਦੋ ਸਟਾਪਾਂ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ)।ਬੇਸ) ਇੱਕ ਕੋਡੋਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ AA ਜਾਂ GA ਜੋ ਕਿ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਨੂੰ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਨ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਸਾਰਣੀ 1 ਵਿੱਚ ਸੂਚੀਬੱਧ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ ਅਤੇ ਕੰਗਮੇਟ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਕੰ., ਲਿਮਟਿਡ (ਚਾਂਗਚੁਨ, ਚੀਨ) ਦੁਆਰਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
Pfu DNA ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ (Tiangen, ਬੀਜਿੰਗ, ਚੀਨ) ਜਾਂ Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., ਬੀਜਿੰਗ, ਚੀਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਟੀਚਿਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਟੈਂਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ G. duodenalis cDNA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਵੈਕਟਰ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+) ਨੂੰ ਪਾਬੰਦੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮ EcoRV ਨਾਲ ਰੇਖਾਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਾਸਟ ਏਪੀ (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਡੀਫੋਸਫੋਰੀਲੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਲੀਨੀਅਰਾਈਜ਼ਡ pcDNA3.1(+) ਟੁਕੜਿਆਂ ਅਤੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਜੈੱਲ ਸ਼ੁੱਧੀਕਰਨ ਕਿੱਟ (ਟੀਅਨਜੇਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਨੈਨੋਡ੍ਰੌਪ ਐਨਡੀ-2000 (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।pcDNA3.1(+) ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟ ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ MonClone ਸਿੰਗਲ ਅਸੈਂਬਲੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਮਿਸ਼ਰਣ (ਮੋਨਾਡ ਬਾਇਓਟੈਕ ਕੰਪਨੀ, ਲਿਮਟਿਡ, ਸੁਜ਼ੌ, ਚੀਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦੁਬਾਰਾ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕੋਮੇਟ ਬਾਇਓਸਾਇੰਸ ਕੰਪਨੀ ਲਿਮਿਟੇਡ (ਚਾਂਗਚੁਨ, ਚੀਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ ਦੁਆਰਾ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।.
ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ਸੈਨਪ੍ਰੈਪ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਮਿੰਨੀ ਕਿੱਟ (ਸਾਂਗਨ ਬਾਇਓਟੈਕ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ 500 ng/µl ਤੋਂ ਉੱਪਰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ ਕਿ ਇਲੂਸ਼ਨ ਬਫਰ ਵਿੱਚ EDTA ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਪਰਖ ਵਿੱਚ ਦਖਲ ਨਹੀਂ ਦਿੰਦਾ।ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਾਊਸ ਪੇਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਨੂੰ 12 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ RPMI 1640 ਮਾਧਿਅਮ (ਜੈਵਿਕ ਉਦਯੋਗ) ਦੇ ਨਾਲ 6-ਖੂਹ ਵਾਲੀਆਂ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਫਿਰ ਪੈਨਿਸਿਲਿਨ ਅਤੇ ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਨ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਕੋਸ਼ੀਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਨਿੱਘੇ ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) Opti-MEM ਘਟਾਏ ਗਏ ਸੀਰਮ ਮਾਧਿਅਮ (Gibco, ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਦੇ 125 μl ਵਿੱਚ ਪੇਤਲੀ ਪੈ ਗਏ ਸਨ।.ਫਿਰ ਲਿਪੋਫੈਕਟਾਮਾਈਨ 2000 ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਰੀਏਜੈਂਟ (ਇਨਵਿਟ੍ਰੋਜਨ, ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਦੇ 5 µl ਨੂੰ ਘੱਟ ਸੀਰਮ Opti-MEM ਮਾਧਿਅਮ ਦੇ 125 µl ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਲਿਪੋਫੈਕਟਾਮਾਈਨ 2000 ਦੇ ਨਾਲ ਪਤਲੇ ਐਂਡੋਟੌਕਸਿਨ-ਮੁਕਤ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਮਿਕਸ ਕਰਕੇ ਅਤੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਖੜ੍ਹਾ ਕਰਕੇ ਲਿਪੋਸੋਮ-ਡੀਐਨਏ ਕੰਪਲੈਕਸ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।ਕੰਪਲੈਕਸਾਂ ਨੂੰ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕਰੋ ਅਤੇ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਮਿਕਸ ਕਰੋ।4 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ 2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸੰਪੂਰਨ RPMI 1640 ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਕਲਚਰ ਨੂੰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਜਾਰੀ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ।ਤਾਜ਼ੇ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪਰਖ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਮਾਂ ਬਿੰਦੂਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟਸ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੈਟਸ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਸੀ [25]।ਪ੍ਰੋ-IL-1β, ਪ੍ਰੋ-ਕੈਸਪੇਸ-1, ਕੈਸਪੇਸ-1 p20, NLRP3, β-ਐਕਟਿਨ, ਅਤੇ ਹਿਜ਼-ਟੈਗ ਲਈ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਤਬਾਦਲੇ ਦੇ ਮਾਪਦੰਡ 200 mA/90 ਮਿੰਟ ਸਨ।ਇੰਟਰਲਿਊਕਿਨ 1β (IL-1β; R&D ਸਿਸਟਮ, ਮਿਨੀਆਪੋਲਿਸ, ਮਿਨੇਸੋਟਾ, ਯੂਐਸਏ), ਕੈਸਪੇਸ-1 (ਪੀ20) (ਐਡੀਪੋਜੇਨ, ਸਵਿਟਜ਼ਰਲੈਂਡ) ਅਤੇ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 (ਐਡੀਪੋਜੇਨ SA, ਐਪੀਲਿੰਗਸ, ਸਵਿਟਜ਼ਰਲੈਂਡ) ਅਤੇ 1:5000 ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਉਸਦੇ ਟੈਗ (ਐਮੀਲੇਟ ਵਿਗਿਆਨਕ) ਲਈ ਵੁਹਾਨ, ਚੀਨ) ਅਤੇ β-ਐਕਟਿਨ (ਪ੍ਰੋਟੀਨਟੈਕ, ਵੁਹਾਨ, ਚੀਨ)।
ਡਿਸਕਸੀਨਾਈਮਾਈਡ ਸਬਰੇਟ (ਡੀਐਸਐਸ) ਨਾਲ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਸੀ [26].ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਠੰਡੇ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 50 μl ASC ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਬਫਰ (pH 8.0) ਵਿੱਚ 27 ਗੇਜ ਸੂਈ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ਅਤੇ 125 mM NaHCO3 ਸਨ।ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ 3 ਮਿੰਟ ਲਈ 5000 g 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਗੋਲੀ ਨੂੰ 10 μl DSS (DMSO ਵਿੱਚ 25 mM) ਅਤੇ 40 μl ASC ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਬਫਰ ਨਾਲ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।10 ਮਿੰਟ ਲਈ 5000 ਗ੍ਰਾਮ 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਗੋਲੀ ਨੂੰ ASC ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਬਫਰ ਦੇ 40 µl ਅਤੇ 6x ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਲੋਡਿੰਗ ਬਫਰ (ਟਰਾਂਸਜੇਨ, ਬੀਜਿੰਗ, ਚੀਨ) ਦੇ 10 µl ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਘੋਲ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 15 ਲਈ ਬੁਝਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਿੰਟ, ਫਿਰ 10 ਮਿੰਟ ਉਬਾਲੋ।ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 1:500 ਦੇ ਪਤਲੇ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀ-ਏਐਸਸੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (ਵਾਨਲੇਬੀਓ, ਸ਼ੇਨਯਾਂਗ, ਚੀਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਿਤ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ [13] ਦੇ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟਸ ਦੀ ਕਟਾਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਮਾਊਸ IL-1 ਬੀਟਾ ਏਲੀਸਾ ਕਿੱਟ (ਇਨਵੀਟ੍ਰੋਜਨ, ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰੋ-ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਸਾਈਟੋਕਾਈਨ IL-1β ਦਾ secretion ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।IL-1β ਸਟੈਂਡਰਡ ਕਰਵ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ OD450nm ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਬਦਲੋ।
ਕਵਰਲਿਪਸ 'ਤੇ ਕੋਟ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨਿੱਘੇ ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ 3 ਵਾਰ ਨਰਮੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ, ਟਿਸ਼ੂ ਸੈੱਲ ਫਿਕਸਟਿਵ (ਬਾਇਓਸ਼ਾਰਪ, ਬੀਜਿੰਗ, ਚੀਨ) ਵਿੱਚ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (ਆਰਟੀ) ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, 0.1% ਟ੍ਰਾਈਟਨ ਐਕਸ-ਪਰਮੀਏਬਲਾਈਜ਼ ਵਿੱਚ 100 (ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ; ਬਾਇਓਸ਼ਾਰਪ) ) ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 5% ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ ਐਲਬਿਊਮਿਨ (ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ) ਵਿੱਚ ਬਲਾਕ ਕਰੋ।ਫਿਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ASC (1:100 dilution) ਜਾਂ NLRP3 (1:100 dilution) ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨਾਲ 4°C 'ਤੇ ਰਾਤੋ ਰਾਤ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ Cy3 ਲੇਬਲ ਵਾਲਾ ਬੱਕਰੀ ਵਿਰੋਧੀ IgG(H+L) (1:400; EarthOx) , ਸੈਨ ਫ੍ਰਾਂਸਿਸਕੋ, CA, USA) ਜਾਂ FITC-ਸੰਯੁਕਤ ਬੱਕਰੀ ਵਿਰੋਧੀ ਮਾਊਸ IgG (1:400; ਅਰਥੌਕਸ) ਰਾਤ ਨੂੰ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ 37°C 'ਤੇ।ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, China) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (ਓਲੰਪਸ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਚਾਰ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ n = 7): (i) ਪੀਬੀਐਸ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ (ਕੇਵਲ ਪੀਬੀਐਸ; ਗੈਵੇਜ 100 µl/ਮਾਊਸ ਪੀਬੀਐਸ ਅਤੇ ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਇੰਟਰਾਪੇਰੀਟੋਨੀਅਲ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ 100 µl/ਮਾਊਸ ਪੀਬੀਐਸ 3 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ)।, ਲਗਾਤਾਰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ);(ii) MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ [27] (PBS gavage ਦੁਆਰਾ 100 μl/ਮਾਊਸ, 3 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ, 10 mg/kg ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ [BW] MCC950 [PBS ਵਿੱਚ] ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਰੋਜ਼ਾਨਾ, ਅੰਤਰਾਲ 7 ਦਿਨ);(iii) G. duodenalis cyst ਸੰਕ੍ਰਮਣ ਸਮੂਹ (1.5 x 106 cysts/mouse by gavage, 3 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ, 100 μl/ਮਾਊਸ PBS intraperitoneally 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸ਼ਿਤ);(iv) G. duodenalis cyst ਸੰਯੁਕਤ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਗਰੁੱਪ MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ (1.5×106 cysts/mouse through gavage, 10mg/kg ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ MCC950 intraperitoneally 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਰੋਜ਼ਾਨਾ 3h 'ਤੇ)।ਹਰੇਕ ਚੂਹੇ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ ਦੀ ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਸੀ ਅਤੇ 7ਵੇਂ ਦਿਨ ਸਾਰੇ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਈਥਨਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਸੀ।ਕਟਾਈ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੂਓਡੇਨਮ (3 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਲੰਬੇ) ਨੂੰ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਪੀਬੀਐਸ ਵਿੱਚ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਵਿੱਚ ਸਿਸਟਾਂ ਨੂੰ ਰਾਤੋ ਰਾਤ ਨਸ਼ਟ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ।ਤਾਜ਼ੇ ਡੂਓਡੇਨਮ (1 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਲੰਬਾ) ਨੂੰ ਹੇਮੇਟੋਕਸੀਲਿਨ ਅਤੇ ਈਓਸਿਨ (H&E) ਦਾਗ਼ ਲਈ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਦੋ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ: (i) MOCK ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ (ii) MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਗਰੁੱਪ।ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ (n = 7/ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ) ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਇਲਾਜ ਸਨ: (i) ਪੀਬੀਐਸ ਇਲਾਜ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ (ਸਿਰਫ਼ ਪੀਬੀਐਸ; 100 μl/ਮਾਊਸ ਪੀਬੀਐਸ, ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ (ਆਈਐਮ) ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ (ਟਿਬਾਇਲਿਸ ਐਨਟੀਰੀਅਰ) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੈਗੇਟਿਵ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ (100 µg/ਮਾਊਸ ਡੀਐਨਏ, ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਰਾਹੀਂ); ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 μg/ਮਾਊਸ ਡੀਐਨਏ, ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ), ਅਤੇ (v) ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-7.3 (100 μg/ਮਾਊਸ) ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸਮੂਹ ਡੀਐਨਏ, ਬੀਤਣ ਦੇ 12 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ, MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ MCC950 (10 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਕਿਲੋਗ੍ਰਾਮ ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ) ਦਾ ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਇੰਟਰਾਪੇਰੀਟੋਨੀਅਲ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੋਇਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ MOCK ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਪੀਬੀਐਸ ਇਲਾਜ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਖੂਨ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਮਿਲੇ। IL-1β ਪੱਧਰਾਂ ਲਈ ਅਤੇ ਮਾਪ ਲਈ ਐਨਜ਼ਾਈਮ-ਲਿੰਕਡ ਇਮਯੂਨੋਸੋਰਬੈਂਟ ਐਸੇ (ELISA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਅੱਖਾਂ ਦੇ ਚੂਹਿਆਂ ਤੋਂ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅਤੇ 4 °C 'ਤੇ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ ਛੱਡ ਦਿੱਤੇ ਗਏ।
ਪੈਂਤੀ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਪੰਜ ਸਮੂਹਾਂ (n=7/ਗਰੁੱਪ) ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਗਰੁੱਪ 1 ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਸੀ ਜਿਸਦਾ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ: ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 100 μl ਪੀਬੀਐਸ ਅੰਦਰੂਨੀ ਤੌਰ ਤੇ ਅਤੇ 3 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਗੈਵੇਜ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਗਰੁੱਪ 2 ਇੱਕ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਹੈ ਜੋ G. duodenalis cysts ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਹੈ: ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 100 μl PBS ਨਾਲ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ 3 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ 1.5 x 106 cysts/ਮਾਊਸ ਨੂੰ ਅੰਦਰੂਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਤੀਜਾ ਸਮੂਹ - ਪੀਸੀਡੀਐਨਏ3.1(+) ਦੇ ਨਾਲ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਇਮਯੂਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਡੂਓਡੀਨਲ ਸਿਸਟ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਲਈ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਨਾਲ: ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 100 μg ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ pcDNA3.1(+)(im) ਜ਼ੁਬਾਨੀ, 1.5×106 ਸਿਸਟ/ਮਾਊਸ 3 ਕਈਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਾਪਤ ਹੋਇਆ। ਦਿਨਗਰੁੱਪ 4 ਅਤੇ 5 ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਸਿਸਟ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਵਿੱਚ ਪੀਸੀਡੀਐਨਏ3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਪਲਾਜ਼ਮਿਡ ਜਾਂ ਪੀਸੀਡੀਐਨਏ3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗੀਅਰਡਾਈਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਸਨ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹ: ਚੂਹਿਆਂ ਨੇ 100 µg pcDNA3 ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ।1(+)-ਗਿਆਰਡੀਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ (ਆਈਐਮ), ਫਿਰ 3 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, 1.5 × 106 ਸਿਸਟ/ਮਾਊਸ ਨੂੰ ਗੈਵੇਜ ਦੁਆਰਾ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਊਬ ਰਾਹੀਂ G. duodenalis cyst ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹਰੇਕ ਮਾਊਸ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਤਾਜ਼ੇ ਡੂਓਡੇਨਮ ਨੂੰ ਪਰਜੀਵੀ ਲੋਡ ਮਾਪ ਅਤੇ HE ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਹਿਸਟੋਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ [30] ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਜ਼ੇ ਡੂਓਡੇਨਮ ਨੂੰ ਟਿਸ਼ੂ ਸੈੱਲ ਫਿਕਸਟਿਵ ਨਾਲ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਪੈਰਾਫਿਨ ਵਿੱਚ ਏਮਬੇਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, 4 μm ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, H&E ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਹਲਕੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸੱਤ ਸੁਤੰਤਰ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਸੱਤ ਟਿਸ਼ੂ ਭਾਗਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਇੱਕ ਪੈਥੋਲੋਜਿਸਟ ਦੁਆਰਾ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਅਣਜਾਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 200x ਵਿਸਤਾਰ 'ਤੇ ਕੈਪਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਵਿਲੀ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦੀ ਡੂੰਘਾਈ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਗਏ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ.
ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਵਿਵੋ ਵਿੱਚ ਨਤੀਜੇ ਤਿੰਨ ਗੁਣਾਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗ੍ਰਾਫ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਦੋ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ ≥3 ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ SPSS ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਵਰਜਨ 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵਿਭਿੰਨਤਾ (ANOVA) ਦੇ ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਲੇਵੇਨ ਦੇ ਟੈਸਟ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਬੋਨਫੇਰੋਨੀ ਦੇ ਪੋਸਟ-ਹਾਕ ਟੈਸਟ (ਬੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦੀ ਸਮਰੂਪਤਾ ਲਈ ਡੇਟਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਮਹੱਤਤਾ ਨੂੰ P<0.05, P<0.01, ਅਤੇ P<0.001 (ਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ [ns]) (P>0.05) ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਜੀਨ ਅਤੇ ਜੀਨੋਮਜ਼ ਦੇ ਕਯੋਟੋ ਐਨਸਾਈਕਲੋਪੀਡੀਆ (ਕੇ.ਈ.ਜੀ.ਜੀ.) ਵਿੱਚ GEV ਪ੍ਰੋਟੀਓਮਿਕਸ ਦੇ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਟੀਚੇ ਭੜਕਾਊ ਸਿਗਨਲ ਮਾਰਗਾਂ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ [13]।ਅਸੀਂ ਦੋ ਹੋਨਹਾਰ ਟੀਚਿਆਂ, ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡਿਨ ਨੂੰ ਚੁਣਿਆ ਹੈ, ਇਹਨਾਂ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਅਤੇ pcDNA3.1(+) ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਵੈਕਟਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਕ੍ਰਮਬੱਧ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਅਤੇ alpha-7.3 giardine ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਾਊਸ ਪੈਰੀਟੋਨਿਅਲ ਮੈਕਰੋਫੇਜਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਕੈਸਪੇਸ-1 p20 ਸੋਜਸ਼ ਦੇ ਸਿਗਨੇਚਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਕੈਸਪੇਸ-1 ਦਾ ਇੱਕ ਟੁਕੜਾ) ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਮੁੱਖ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਜੋ ਸੋਜਸ਼ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਜੀਆਰਡੀਨ ਜੀਈਵੀ ਦੇ ਸਮਾਨ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1 ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ (ਕੇਵਲ ਪੀਬੀਐਸ) ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਕੰਟਰੋਲ pcDNA3.1(+) (ਚਿੱਤਰ 1) ਵਿੱਚ ਕੈਸਪੇਸ-1 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ 'ਤੇ ਕੋਈ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਾਇਆ ਗਿਆ।
pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਅਤੇ alpha-7.3 giardins ਦੁਆਰਾ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦਾ ਮਾਪ।ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡਾਈਨਜ਼ (ਹਰੇਕ ਲੇਨ ਦੇ ਉੱਪਰ) ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਾਊਸ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੇਜਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਲਚਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟਸ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਕਟਾਈ ਗਏ ਸਨ।ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਿਗਨੇਚਰ ਕੈਸਪੇਸ-1 p20 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।PBS-ਸਿਰਫ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ (ਲੇਨ C) ਅਤੇ pcDNA3.1(+) ਮੋਨੋਥੈਰੇਪੀ ਗਰੁੱਪ (pcDNA3.1 ਲੇਨ) ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ GEV ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਰੇਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਹਿਸਟਿਡਾਈਨ ਟੈਗ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾ ਕੇ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਸੰਭਾਵਿਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਬੈਂਡ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ (38.2 ਕੇਡੀਏ) ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ (37.2 ਕੇਡੀਏ) ਸਨ।GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-ਲੀਨੀਅਰਾਈਜ਼ਡ ਵੈਕਟਰ, SUP, supernatant
ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1 ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਹੋਸਟ NLRP3 ਭੜਕਾਊ ਜਵਾਬ, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ। -7.3 ਗਿਅਰਡਿਨ ਨੂੰ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਾਲ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਾਊਸ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਮੁੱਖ ਸੋਜਸ਼ ਪ੍ਰੋਟੀਨ NLRP3 ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ, ਸਥਾਨੀਕਰਨ, ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਸ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ, GEV ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਕੋਈ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ (ਕੇਵਲ PBS) ਜਾਂ pcDNA3.1(+) ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਸੀ।ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ GEV ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ, giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਅਤੇ giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ਦੇ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ NLRP3, ਪ੍ਰੋ-IL-1β ਅਤੇ procaspase-1 ਅਤੇ caspase-1 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ (Fig. 2a)।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਦੋਵੇਂ ਗਿਆਰਡੀਨ ਨੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ IL-1β secretion (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.007 ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (ਚਿੱਤਰ 2b)।ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ASC ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੋ-ਟਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਵਿੱਚ ਜਾਂ pcDNA3.1(+) ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨਾਲ ਟਰਾਂਸਫੈਕਟ ਕੀਤੇ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ, pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਜਾਂ pcDNA3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ- ਦੇ ਉਲਟ ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ ਸਨ। 7.3 ਗਿਅਰਡੀਨ।ASC ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ GEV ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਜਾਂ ਸਮੂਹ ਦੇ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ ਵਿੱਚ ਹੋਇਆ, ਇੱਕ ਓਲੀਗੋਮੇਰਿਕ ਰੂਪ (ਚਿੱਤਰ 2c) ਦਿਖਾ ਰਿਹਾ ਹੈ।ਇਹ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਅੰਕੜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7,3 ਗਿਅਰਡਾਈਨ NLRP3 ਸੋਜਸ਼ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।ASC ਅਤੇ NLRP3 ਦੇ ਸਥਾਨਕਕਰਨ ਦੇ ਬਾਅਦ ਦੇ ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ, ASC ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੂਰੇ cytoplasm ਵਿੱਚ ਖਿੰਡੇ ਹੋਏ ਸਨ ਅਤੇ giardine ਜਾਂ pcDNA3 ਦੇ ਨਾਲ pcDNA3.1(+)-alpha-2 ਦੇ ਉਤੇਜਿਤ ਹੋਣ 'ਤੇ ਇੱਕ ਬਿੰਦੂ ਸਿਗਨਲ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ ਹੋਇਆ ਸੀ।1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-7,3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਗਰੁੱਪ ਜਾਂ GEV ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ (ਚਿੱਤਰ 2d)।ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ pcDNA 3.1 ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ, NLRP3 ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਿਗਨਲ ਦਾ ਪਤਾ ਨਹੀਂ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਜਾਂ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਸਿਗਨਲ ਬਿੰਦੀ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ..giardine cytoplasm ਵਿੱਚ ਜਾਂ HEV (ਚਿੱਤਰ 2e) ਦੇ ਉਤੇਜਿਤ ਹੋਣ 'ਤੇ ਪਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਅੱਗੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ G. duodenalis giardin alpha-2 ਅਤੇ giardin alpha-7.3 ਮਾਊਸ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜਾਂ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ਮਾਊਸ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 Giardin ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਮਿਊਰੀਨ ਪੈਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੇਜ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕਰੋ, ਜਾਂ ਸਮੀਕਰਨ, ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਦੀ ਵਾਢੀ ਕਰੋ। , secretion.ਅਤੇ ਮੁੱਖ ਸੋਜਸ਼ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਸਥਾਨੀਕਰਨ।PBS-ਸਿਰਫ (C) ਸਮੂਹ ਅਤੇ pcDNA3.1 (+) ਸਿੰਗਲ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ GEV ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਸੋਜਸ਼ ਪ੍ਰੋਟੀਨ NLRP3, ਜਿਸ ਵਿੱਚ NLRP3, ਪ੍ਰੋ-IL-1β, ਪ੍ਰੋ-ਕੈਸਪੇਸ-1, ਅਤੇ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1, ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਖੋਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।b ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟਸ ਵਿੱਚ IL-1β ਦੇ secretion ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ-ਲਿੰਕਡ ਇਮਯੂਨੋਸੋਰਬੈਂਟ ਅਸੇ (ELISA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰਾਂ ਦਾ SPSS ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 22.0 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵਿਭਿੰਨਤਾ (ANOVA) ਦੇ ਇੱਕ-ਤਰਫਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਰੇ **P<0.01 ਅਤੇ ***P<0.001 ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।c ਪੈਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਏਐਸਸੀ ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਡੀਐਸਐਸ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੈਟਸ ਵਿੱਚ ਏਐਸਸੀ ਪੱਧਰ ਇੱਕ ਲੋਡਿੰਗ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤੇ ਗਏ ਸਨ।d ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ISC ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਦੀ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ।e ਇਮਯੂਨੋਫਲੋਰੇਸੈਂਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ NLRP3 ਦੇ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ASC, apoptotic spec-like ਪ੍ਰੋਟੀਨ;IL, interleukin;NLRP3, ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ-ਬਾਈਡਿੰਗ oligomerization-ਵਰਗੇ ਰੀਸੈਪਟਰ 3;ns, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ (P > 0.05)
G. duodenalis ਅਤੇ GEVs ਦੋਵੇਂ ਜੋ ਇਸ ਨੂੰ ਛੁਪਾਉਂਦੇ ਹਨ, NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਹੋਸਟ ਸੋਜਸ਼ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਅਸਪਸ਼ਟ ਰਹਿੰਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਮੁੱਦੇ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ G. duodenalis cyst ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਅਤੇ G. duodenalis cyst + MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਪ੍ਰਯੋਗ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਹੈ ਅਤੇ G. duodenalis cyst ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਹੋਣ 'ਤੇ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਸਮੀਕਰਨ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਯੋਜਨਾ ਚਿੱਤਰ 3a ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ।ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਗੱਠਿਆਂ ਦੀ ਲਾਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਚਿੱਤਰ 3b ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ।ਸ਼ੁੱਧ PBS ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਮੂਹ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ (i) G. duodenalis cyst ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਦਾ ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ ਲਾਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 3 ਦਿਨ ਤੋਂ 7 ਦਿਨ ਤੱਕ ਘੱਟ ਗਿਆ;(ii) MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਦਾ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ 'ਤੇ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਿਆ।.ਸਿੰਗਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, MCC950 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੂਓਡੀਨਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਗਰੁੱਪ ਦਾ ਬੀਡਬਲਯੂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡਿਗਰੀ ਤੱਕ ਘੱਟ ਗਿਆ (ਦਿਨ 1: ਅਨੋਵਾ, ਐੱਫ(3, 24) = 1.885, ਪੀ = 0.0148; ਦਿਨ 2: ਅਨੋਵਾ, ਐੱਫ(3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001; ਦਿਨ 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ਦਿਨ 4: ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052, ANOVA; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; ਦਿਨ 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; ਦਿਨ 7: ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202)।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਡੂਓਡੇਨਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪੜਾਵਾਂ (2-4 ਦਿਨ) ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭਾਰ ਘਟਾਉਣ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਫਿਰ ਡੂਓਡੀਨਲ ਲੈਵੇਜ ਤਰਲ ਵਿੱਚ G. duodenalis trophozoites ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ ਰੱਖਿਆ ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ ਚਿੱਤਰ 3c ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ।G. duodenalis cyst ਸੰਕ੍ਰਮਣ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ (t(12) = 2.902, P = 0.0133) ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਡੂਓਡੇਨਮ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ।HE ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਡੂਓਡੇਨਲ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ, ਸਿਰਫ਼ PBS ਅਤੇ MCC950 ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ: (i) G. duodenalis cyst ਦੀ ਲਾਗ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ duodenal villi (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ) ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਪਟ ਐਟ੍ਰੋਫੀ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) G. duodenalis cysts ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਤੋਂ duodenum ਅਤੇ MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਐਟ੍ਰੋਫੀ ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਪਟ ਬ੍ਰਾਂਚਿੰਗ (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. 3d- f) .ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ G. duodenalis ਦੀ ਜਰਾਸੀਮ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ।
Giardia duodenum ਦੀ ਲਾਗ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ.ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਡੂਓਡੇਨੋਕੋਕਲ ਸਿਸਟਾਂ ਨਾਲ ਗੈਵੇਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (iv) ਅਤੇ ਫਿਰ MCC950 (ip) ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।PBS ਜਾਂ MCC950 ਵਾਲੇ ਸਿੰਗਲ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਦੀ ਵਿਧੀ।b ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ ਦੀ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।G. duodenalis ਲਾਗ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ G. duodenalis + MCC950 ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦਾ SPSS ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 22.0 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਰੇ *P<0.05, **P<0.01, ਜਾਂ ***P<0.001 ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।c ਪਰਜੀਵੀ ਲੋਡ ਨੂੰ ਡਿਊਡੀਨਲ ਲੈਵੇਜ ਤਰਲ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।G. duodenalis ਲਾਗ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ G. duodenalis + MCC950 ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦਾ SPSS ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 22.0 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਰੇ *P <0.05 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।d ਹੈਮੇਟੋਕਸੀਲਿਨ ਅਤੇ ਈਓਸਿਨ (H&E) ਡੂਓਡੀਨਲ ਹਿਸਟੋਪੈਥੋਲੋਜੀ ਦੇ ਧੱਬੇਦਾਰ ਨਤੀਜੇ।ਲਾਲ ਤੀਰ ਵਿਲੀ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਹਰੇ ਤੀਰ ਕ੍ਰਿਪਟਸ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਸਕੇਲ ਬਾਰ: 100 µm।e, f ਡੂਓਡੇਨਲ ਵਿਲਸ ਦੀ ਉਚਾਈ ਅਤੇ ਮਾਊਸ ਕ੍ਰਿਪਟ ਦੀ ਉਚਾਈ ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ।ਤਾਰੇ *P<0.05 ਅਤੇ **P<0.01 ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਨਤੀਜੇ 7 ਸੁਤੰਤਰ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਹਨ।BW, ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ;ig, intragastric ਡਿਲੀਵਰੀ ਰੂਟ;ip, intraperitoneal ਡਿਲੀਵਰੀ ਰੂਟ;ns, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ (P > 0.05);PBS, ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰਡ ਖਾਰਾ;WT, ਜੰਗਲੀ ਕਿਸਮ
IL-1β ਦਾ secretion ਸੋਜਸ਼ ਸਰਗਰਮੀ ਦੀ ਇੱਕ ਪਛਾਣ ਹੈ।ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ G. duodenalis alpha-2 giardine ਅਤੇ alpha-7.3 giardine Vivo ਵਿੱਚ NLRP3 ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਸੀਂ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ WT ਮਾਊਸ (ਸ਼ੈਮ ਗਰੁੱਪ) ਅਤੇ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ-ਬਲੌਕਡ ਮਾਊਸ (MCC950 ਇਨਹਿਬਿਟਿਡ ਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਯੋਜਨਾ ਚਿੱਤਰ 4a ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦਾ ਪੀ.ਬੀ.ਐੱਸ., ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਸਿਸਟ ਗੈਵੇਜ ਦੁਆਰਾ ਇਲਾਜ, pcDNA3.1 ਦਾ ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ, ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਜਾਂ pcDNA3.1-ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਦਾ ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਦੇ ਬਾਅਦ 7 ਵੇਂ ਦਿਨ, ਸੀਰਮ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ IL-1β ਦਾ ਪੱਧਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 4b ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, MOCK ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ: (i) PBS ਸਮੂਹ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, pcDNA3.1 ਇਲਾਜ ਦਾ IL-1β secretion (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998) 'ਤੇ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਿਆ, ਹਾਲਾਂਕਿ, IL-β secretion G. duodenalis cyst group (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ਅਤੇ pcDNA3 ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉੱਚਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।1- ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਦੇ ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਨੇ ਸੀਰਮ IL-1β ਪੱਧਰਾਂ (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001) ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਕੀਤਾ;(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine ਨੇ pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) ਵਿੱਚ IL-1β secretion ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ। .MCC950 ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ ਅਤੇ MOCK ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਦੇ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ: (i) PBS ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਅਤੇ pcDNA3.1 ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ IL-1β secretion ਦਾ ਪੱਧਰ MCC950 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇੱਕ ਨਿਸ਼ਚਿਤ ਹੱਦ ਤੱਕ ਘਟਿਆ, ਪਰ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਸੀ. ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950 ਨੂੰ ਬਲਾਕ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ।, IL-1β secretion G. duodenalis cyst-infected group, pcDNA3.1-alpha-2 giardine ਗਰੁੱਪ, ਅਤੇ pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine ਗਰੁੱਪ (G. duodenalis: ANOVA, F(9) ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਗਿਆ ਸੀ। . ) = 3.540, ਪੀ = 0.0164)।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਦੇ ਹਨ।
pcDNA3.1(+)-giardines Vivo ਵਿੱਚ NLRP3 ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਜਾਂ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ਨਾਲ ਟੀਕਾਕਰਨ (IM) ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ MCC950 (ip; MCC950 ਗਰੁੱਪ) ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਾਂ ਨਹੀਂ (ਡਮੀ ਗਰੁੱਪ) ).PBS ਜਾਂ pcDNA3.1(+) ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, G. duodenalis cyst ਟਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਦੀ ਵਿਧੀ।b ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ IL-1β ਦੇ ਸੀਰਮ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ELISA ਪਰਖ ਦੁਆਰਾ 7ਵੇਂ ਦਿਨ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।MOCK ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ SPSS ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 22.0 ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ MOCK ਸਮੂਹ ਅਤੇ MCC950 ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਰੇ MOCK ਸਮੂਹ, *P<0.05 ਅਤੇ ***P<0.001; ਵਿੱਚ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ;ਡਾਲਰ ਦੇ ਚਿੰਨ੍ਹ ($) MOCK ਸਮੂਹ ਅਤੇ MCC950 ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ P<0.05 ਵਿੱਚ ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਸੱਤ ਸੁਤੰਤਰ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ।i, ਇੰਟਰਾਮਸਕੂਲਰ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ, NS, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ (P > 0.05)
G. duodenalis infectivity 'ਤੇ NLRP3 ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੇ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ-ਵਿਚੋਲੇ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ WT C57BL/6 ਮਾਊਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡੀਨ ਦਾ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ।G. duodenalis cyst ਦੀ ਗੈਸਟ੍ਰਿਕ ਟਿਊਬ ਰਾਹੀਂ 3 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਨੂੰ ਅੰਦਰੂਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਯੋਜਨਾ ਚਿੱਤਰ 5a ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਈ ਗਈ ਹੈ।ਹਰੇਕ ਮਾਊਸ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦੇ ਭਾਰ ਨੂੰ ਹਰ ਰੋਜ਼ ਮਾਪਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ, ਗੈਸਟਰਿਕ ਟਿਊਬ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 7 ਵੇਂ ਦਿਨ ਤਾਜ਼ੇ ਡੂਓਡੇਨਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਮਾਪੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਹਿਸਟੋਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਵੇਖੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ.ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 5b ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਖੁਆਉਣ ਦਾ ਸਮਾਂ ਵਧਣ ਦੇ ਨਾਲ, ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦਾ ਬੀਡਬਲਯੂ ਹੌਲੀ ਹੌਲੀ ਵਧਦਾ ਗਿਆ।G. duodenalis cysts ਦੇ intragastric ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਤੀਜੇ ਦਿਨ ਚੂਹਿਆਂ ਦਾ MT ਘਟਣਾ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਵਧਿਆ।ਐਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਟੀਕੇ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲੇਮਾਸੋਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਭਾਰ ਘਟਾਉਣ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਮੀ ਕੀਤੀ (ਦਿਨ 1: ਪੀਸੀਡੀਐਨਏ3.1-ਐਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ, ਅਨੋਵਾ, ਐਫ(4, 30) = 1.39, ਪੀ. = 0 .9754 ਦਿਨ 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 ਦਿਨ 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; ਦਿਨ 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; ਦਿਨ 3: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, F 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 ਦਿਨ 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.8222, P = 0.0083 ਦਿਨ 4: pcDNA3.1-alpha-2giardine; , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, ਦਿਨ 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, ਦਿਨ 5: pcDNA3.1-alpha - 2 ਗਿਆਰਡੀਨ, ਅਨੋਵਾ, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ਦਿਨ 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 ਦਿਨ 6: pcDNA alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, ਦਿਨ 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;ਦਿਨ 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 ਦਿਨ 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P <0.0001)।ਡੂਓਡੇਨਮ (ਚਿੱਤਰ 5c) ਵਿੱਚ ਪਰਜੀਵੀ ਲੋਡ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਅਤੇ ਖਾਲੀ pcDNA3.1 ਵੈਕਟਰ ਦੇ ਨਾਲ ਟੀਕੇ ਲਗਾਏ ਗਏ ਸਮੂਹ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ, α-2 giardine ਅਤੇ α-7,3 giardine (pcDNA3.1-ਅਲਫ਼ਾ) ਨਾਲ ਟੀਕੇ ਲਗਾਏ ਗਏ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ G. duodenalis trophozoites ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕਾਫ਼ੀ ਘੱਟ ਗਈ ਸੀ। -2 ਗਿਆਰਡੀਨ: ਅਨੋਵਾ, ਐੱਫ(3, 24) = 1.209, ਪੀ = 0.0002, ਪੀਸੀਡੀਐਨਏ3.1-ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ: ਅਨੋਵਾ, ਐੱਫ(3, 24) = 1.209, ਪੀ<0.0001)।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, Giardine alfa-7.3 giardine alfa-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) ਨਾਲੋਂ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਸੁਰੱਖਿਆਤਮਕ ਸੀ।HE ਸਟੈਨਿੰਗ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਅੰਜੀਰ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ।5d–f.ਐਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਦੇ ਨਾਲ ਟੀਕੇ ਲਗਾਏ ਗਏ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਅਤੇ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਦੇ ਟੀਕੇ ਵਾਲੇ ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਖਾਲੀ pcDNA3 ਵੈਕਟਰ .1 ਜ਼ੋਮ ਦੇ ਨਾਲ ਟੀਕੇ ਲਗਾਏ ਗਏ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਵਿਲਸ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੂਓਡੇਨਲ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਜਖਮ ਘੱਟ ਸਨ।(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 ਜਾਂ P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 ਜਾਂ P = 0.0055) ਅਤੇ ਘਟੀ ਹੋਈ ਕ੍ਰਿਪਟ ਐਟ੍ਰੋਫੀ (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 ਜਾਂ P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: pcDNA3.1-alpha-2 giardine , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 ਜਾਂ P = 0.0191)।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7,3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਕੇ ਜੀ ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਦੀ ਲਾਗ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ।
G. duodenalis ਲਾਗ ਵਿੱਚ pcDNA3.1(+)-giardins ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ।ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਜਾਂ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ਨਾਲ ਟੀਕਾਕਰਨ (IM) ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ G. duodenalis cysts (ig) ਨਾਲ ਚੁਣੌਤੀ ਦਿੱਤੀ ਗਈ।PBS ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ pcDNA3.1(+) + duodenal cyst ਟਰੀਟਮੈਂਟ ਗਰੁੱਪ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪਾਂ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ duodenal cyst treatment group ਨੂੰ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਦੀ ਵਿਧੀ।b ਵੱਖ-ਵੱਖ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ MT ਦੀ ਚੈਲੇਂਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਤਾਰੇ G. duodenalis ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਗਰੁੱਪ, *P <0.05, **P <0.01, ਅਤੇ ***P <0.001;ਡਾਲਰ ਦਾ ਚਿੰਨ੍ਹ ($) G. duodenalis ਦੇ ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਜਾਰਡੀਨ ਸਮੂਹ, $$P<0.01 ਅਤੇ $$$P<0.001 ਵਿਚਕਾਰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।c ਪਰਜੀਵੀ ਲੋਡ ਨੂੰ ਡੂਓਡੇਨਮ (3 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਲੰਬਾ) ਤੋਂ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਡੂਓਡੇਨਲ ਲੈਵੇਜ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਡੂਓਡੇਨਮ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਪਰਜੀਵੀਆਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।G. duodenalis ਲਾਗ ਗਰੁੱਪ, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ਗਰੁੱਪ, ਅਤੇ pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine ਗਰੁੱਪ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰਾਂ ਦਾ SPSS ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 22.0 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਰੇ **P<0.01 ਅਤੇ ***P<0.001 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।d duodenum ਵਿੱਚ ਹਿਸਟੋਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਤਬਦੀਲੀਆਂ।ਲਾਲ ਤੀਰ ਵਿਲੀ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਹਰੇ ਤੀਰ ਕ੍ਰਿਪਟਸ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਸਕੇਲ ਬਾਰ: 100 µm।e, f ਮਾਊਸ ਡੂਓਡੇਨਲ ਵਿਲਸ ਦੀ ਉਚਾਈ (e) ਅਤੇ ਕ੍ਰਿਪਟ ਉਚਾਈ (f) ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ।ਚਿੱਤਰ 1d ਵਿੱਚ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ SPSS ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 22.0 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਤਰਫਾ ਅਨੋਵਾ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਾਰੇ *P<0.05 ਅਤੇ **P<0.01 ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਸੱਤ ਸੁਤੰਤਰ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੇ ਨਤੀਜੇ।ns, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਨਹੀਂ (P > 0.05)
Giardia duodenum ਮਨੁੱਖਾਂ ਅਤੇ ਹੋਰ ਥਣਧਾਰੀ ਜੀਵਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਜਾਣਿਆ-ਪਛਾਣਿਆ ਅੰਤੜੀ ਪਰਜੀਵੀ ਹੈ ਜੋ giardiasis ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ।2004 ਵਿੱਚ, ਇਸ ਨੂੰ 6 ਸਾਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇਸ ਦੇ ਉੱਚ ਪ੍ਰਚਲਣ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘੱਟ ਸਮਾਜਿਕ-ਆਰਥਿਕ ਸਥਿਤੀ ਵਾਲੇ ਭਾਈਚਾਰਿਆਂ [32] ਵਿੱਚ WHO ਅਣਗਹਿਲੀ ਵਾਲੀਆਂ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੀ ਪਹਿਲਕਦਮੀ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਕੁਦਰਤੀ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਅਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਮਾਊਸ ਦੇ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਨੂੰ ਬਾਹਰਲੇ ਕੋਸ਼ਿਕ ਜਾਲਾਂ [33] ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਨੂੰ ਘੇਰਣ ਅਤੇ ਮਾਰਨ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ G. duodenalis, ਇੱਕ ਗੈਰ-ਹਮਲਾਵਰ ਬਾਹਰੀ ਪਰਜੀਵੀ, p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ਅਤੇ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ ਨੂੰ ਮਾਊਸ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਵਿੱਚ ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ GEV ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।13], 24]।ਹਾਲਾਂਕਿ, GEV ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ-ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਸੋਜਸ਼ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਸਹੀ PAMPs ਅਤੇ giardiasis ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨਾ ਬਾਕੀ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਦੋ ਸਵਾਲਾਂ 'ਤੇ ਰੌਸ਼ਨੀ ਪਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ।
NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮ ਵਿੱਚ ਸਥਿਤ ਹੈ ਅਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਣਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਯੂਰਿਕ ਐਸਿਡ ਕ੍ਰਿਸਟਲ, ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ, ਵਾਇਰਸ ਅਤੇ ਪਰਜੀਵੀ ਦੁਆਰਾ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਪਦਾਰਥਾਂ ਨੂੰ ਮੁੱਖ PAMPs ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਜੋ ਸੋਜ਼ਸ਼ ਸੰਵੇਦਕਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸੋਜਸ਼ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ [34]।ਕੁਝ ਸੰਰਚਨਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਭਿੰਨ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਪਦਾਰਥ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਟੈਫ਼ੀਲੋਕੋਕਸ ਔਰੀਅਸ [35] ਅਤੇ ਐਸਚੇਰੀਚੀਆ ਕੋਲੀ [36] ਤੋਂ ਹੀਮੋਲਾਈਸਿਨ, ਐਂਟਰੋਟੌਕਸਿਨ (ਐਨਐਚਈ) [37] ਤੋਂ ਹੀਮੋਲਾਈਸਿਨ ਬੀਐਲ (ਐਚਬੀਐਲ), ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਸੋਜਸ਼ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਵਾਇਰਲ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਵਾਇਰਲੈਂਸ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ SARS-COV-2 ਲਿਫਾਫੇ (E) ਪ੍ਰੋਟੀਨ [38] ਅਤੇ ਜ਼ੀਕਾ ਵਾਇਰਸ NS5 ਪ੍ਰੋਟੀਨ [39] NLRP3 ਰੀਸੈਪਟਰ ਦੁਆਰਾ ਮਾਨਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ PAMPs ਹਨ।ਪਰਜੀਵੀ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ, ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਪਰਜੀਵੀਆਂ ਨੂੰ ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੋਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ, ਟ੍ਰਾਈਕੋਮੋਨਾਸ ਯੋਨੀਲਿਸ [40], ਟ੍ਰਾਈਪੈਨੋਸੋਮਾ ਕਰੂਜ਼ੀ [41], ਅਤੇ ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ [42]।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਦੇ ਵਾਇਰਲੈਂਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਸੰਘਣੇ ਗ੍ਰੈਨਿਊਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ GRA35, GRA42, ਅਤੇ GRA43, ਲੇਵਿਸ ਚੂਹੇ ਦੇ ਮੈਕਰੋਫੈਜ [43] ਵਿੱਚ ਪਾਈਰੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੁਝ ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਵਿਅਕਤੀਗਤ ਅਣੂਆਂ 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੈਰਾਸਾਈਟ ਝਿੱਲੀ ਲਿਪੋਫੋਸਫੋਗਲਾਈਕਨ [44] ਜਾਂ ਜ਼ਿੰਕ ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ [45]।ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਐਨੇਕਸਿਨ-ਵਰਗੇ ਅਲਫ਼ਾ-ਗਿਆਰਡਿਨ ਪਰਿਵਾਰ ਵਿੱਚੋਂ, ਅਲਫ਼ਾ-1 ਗਿਯਾਰਡਿਨ ਨੂੰ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ [18] ਵਿੱਚ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਸੁਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਟੀਕੇ ਦੇ ਉਮੀਦਵਾਰ ਵਜੋਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।ਸਾਡੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ G. duodenalis virulence factors alpha-2 ਅਤੇ alpha-7,3 giardines ਦੀ ਚੋਣ ਕੀਤੀ, ਜੋ giardia ਲਈ ਵਿਲੱਖਣ ਹਨ ਪਰ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਘੱਟ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਇਹ ਦੋ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਪੀਸੀਡੀਐਨਏ 3.1(+) ਯੂਕੇਰੀਓਟਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਸੋਜਸ਼ ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਕਲੋਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਾਡੇ ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ, ਕਲੀਵਡ ਕੈਸਪੇਸ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਭੜਕਾਊ ਸਰਗਰਮੀ ਦੇ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਉਤੇਜਿਤ ਹੋਣ 'ਤੇ, NLRP3 ASC ਨਾਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਪ੍ਰੋਕੈਸਪੇਸ ਦੀ ਭਰਤੀ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਰਗਰਮ ਕੈਸਪੇਸ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰੋ-IL-1β ਅਤੇ ਪ੍ਰੋ-IL-18 ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ -18, ਪਰਿਪੱਕ IL-1β ਅਤੇ IL-18 ਵਿੱਚ ਵੰਡਦਾ ਹੈ।ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਕੈਸਪੇਸ (ਕੈਸਪੇਸ -1, -4, -5 ਅਤੇ -11) ਸਿਸਟੀਨ ਪ੍ਰੋਟੀਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਪਰਿਵਾਰ ਹੈ ਜੋ ਕਿ ਜਨਮ ਤੋਂ ਬਚਾਅ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ [46] ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਕੈਸਪੇਸ -1 ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਇਨਫਲਾਮਾਸੋਮਜ਼ [47] ਦੁਆਰਾ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਕੈਸਪੇਸ -4, -5, ਅਤੇ -11 ਅਟਿਪੀਕਲ ਇਨਫਲਾਮਾਸੋਮਜ਼ [48] ਦੇ ਗਠਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਕਲੀਵ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਮਾਡਲ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਮਾਊਸ ਪੈਰੀਟੋਨਲ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਜੀ ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਹੋਸਟ NLRP3 ਇਨਫਲੇਮੇਸ਼ਨ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1 ਕਲੀਵੇਡ ਕੈਸਪੇਸ-1 ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਅਲਫ਼ਾ-ਗਿਆਰਡਿਨ ਸੋਜਸ਼ ਦੇ ਆਮ ਸਰਗਰਮੀ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਵਾਇਰਸਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਮੁੱਖ ਵਾਇਰਲੈਂਸ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਖੋਜ ਦੇ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਾਡਾ ਅਧਿਐਨ ਸਿਰਫ ਇੱਕ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਪਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹੋਰ ਅਣੂ ਹਨ ਜੋ ਗੈਰ-ਕਲਾਸੀਕਲ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮਜ਼ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ [13] ਵਿੱਚ ਕਲਾਸੀਕਲ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਕਲਾਸੀਕਲ ਇਨਫਲਾਮਾਸੋਮ ਦੋਵੇਂ ਪਾਏ ਹਨ।ਅੱਗੇ ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕੀ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ p20 ਕੈਸਪੇਸ-1 NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਮੁੱਖ ਅਣੂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਅਤੇ ASC ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡਿਨ ਨੂੰ ਮਾਊਸ ਪੇਰੀਟੋਨੀਅਲ ਮੈਕਰੋਫੇਜ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ, ਇਹ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਿ ਦੋਵੇਂ α-giardins ਸਰਗਰਮ ਹਨ। ਜਲਣਸ਼ੀਲ NLRP3.ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਮੈਨਕੋ-ਪ੍ਰੀਖੋਡਾ ਐਟ ਅਲ. ਤੋਂ ਥੋੜੇ ਵੱਖਰੇ ਹਨ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਕਿ ਜੀ. ਮੂਰੀਸ ਜਾਂ ਈ. ਕੋਲੀ ਈਪੀਈਸੀ ਸਟ੍ਰੇਨ ਨਾਲ ਕੈਕੋ-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਉਤੇਜਨਾ ਹੀ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3, ਏਐਸਸੀ, ਅਤੇ ਕੈਸਪੇਸ-1 ਦੀ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਹੀਂ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਜੀ. ਮੂਰੀਸ ਅਤੇ ਈ. ਕੋਲੀ ਦੀ ਕਾਸਟੀਮੂਲੇਸ਼ਨ ਨੇ ਤਿੰਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ [49] ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਵਧਾਇਆ।ਇਹ ਅੰਤਰ Giardia ਸਪੀਸੀਜ਼, ਸੈੱਲ ਲਾਈਨਾਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਅਸੀਂ 5-ਹਫ਼ਤੇ-ਪੁਰਾਣੀ ਮਾਦਾ WT C57BL/6 ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ MCC950 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵੀਵੋ ਅਸੈਸ ਵਿੱਚ ਵੀ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ, ਜੋ G. duodenalis ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹਨ।MCC950 ਇੱਕ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਅਤੇ ਚੋਣਵੇਂ ਛੋਟੇ ਅਣੂ NLRP3 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਹੈ ਜੋ ਨੈਨੋਮੋਲਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਕੈਨੋਨੀਕਲ NLRP3 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।MCC950 NLRP3 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਪਰ AIM2, NLRC4, ਅਤੇ NLRP1 ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਮਾਰਗ ਜਾਂ TLR ਸਿਗਨਲ ਮਾਰਗ [27] ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਹੈ।MCC950 NLRP3 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ ਪਰ NLRP3 ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ, K+ ਐਫਲਕਸ, Ca2+ ਪ੍ਰਵਾਹ, ਜਾਂ NLRP3 ਅਤੇ ASC ਵਿਚਕਾਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਨਹੀਂ ਹੈ;ਇਸ ਦੀ ਬਜਾਏ, ਇਹ ASC ਓਲੀਗੋਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ [27] ਨੂੰ ਰੋਕ ਕੇ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਜੀਆਰਡੀਨ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਇਨ ਵਿਵੋ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ MCC950 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ।ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਕੈਸਪੇਸ-1 p10 ਪ੍ਰੋ-ਇਨਫਲਾਮੇਟਰੀ ਸਾਈਟੋਕਾਈਨਜ਼ ਪ੍ਰੋ-IL-1β ਅਤੇ ਪ੍ਰੋ-IL-18 ਨੂੰ ਪਰਿਪੱਕ IL-1β ਅਤੇ IL-18 [50] ਵਿੱਚ ਵੰਡਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, MCC950 ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਇਸ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਗਿਆਰਡੀਨ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸੀਰਮ IL-1β ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਇਸ ਗੱਲ ਦੇ ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਕਿ ਕੀ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਸਰਗਰਮ ਸੀ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, MCC950 ਇਲਾਜ ਨੇ ਸੀਰਮ IL-1β ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਹੈ।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਸਪੱਸ਼ਟ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ G. duodenalis giardin alfa-2 ਅਤੇ giardin alfa-7.3 NLRP3 ਮਾਊਸ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਹਨ।
ਪਿਛਲੇ ਦਹਾਕੇ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਡੇਟਾ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ IL-17A G. muris ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕਤਾ ਦਾ ਮੁੱਖ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਹੈ, IL-17RA ਸਿਗਨਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਐਂਟੀਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਪੇਪਟਾਇਡਸ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਨਿਯਮਤ ਕਰਦਾ ਹੈ [51]।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਗਿਅਰਡੀਆ ਦੀ ਲਾਗ ਨੌਜਵਾਨ ਬਾਲਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਅਕਸਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਕਿ ਜਵਾਨ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਗਿਆਰਡੀਆ ਦੀ ਲਾਗ ਇਸਦੇ ਸੁਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਭਾਵ [52] ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਨ ਲਈ IL-17A ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਨਹੀਂ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਖੋਜਕਰਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਹੋਰ ਇਮਯੂਨੋਮੋਡੂਲੇਟਰੀ ਗਿਆਰਡੀਆ ਦੀ ਖੋਜ ਕਰਨ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਹੈਲਮਿੰਥ ਦੀ ਲਾਗ ਦੀ ਵਿਧੀ.ਇੱਕ ਤਾਜ਼ਾ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਲੇਖਕਾਂ ਨੇ ਦੱਸਿਆ ਕਿ G. muris E. coli EPEC ਦੁਆਰਾ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਐਂਟੀਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਪੇਪਟਾਇਡਜ਼ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਅਟੈਚਮੈਂਟ ਸਮਰੱਥਾ ਅਤੇ ਅੰਤੜੀ ਟ੍ਰੈਕਟ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਕੋਲਨ ਦੀ ਗੰਭੀਰਤਾ ਘਟਦੀ ਹੈ। ਬੇਸੀਲੀ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੀਆਂ ਬਿਮਾਰੀਆਂ [49]।NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਸੂਡੋਮੋਨਾਸ ਐਰੂਗਿਨੋਸਾ ਸੈੱਲ ਦੀ ਮੌਤ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਮੈਕਰੋਫੈਜਾਂ ਵਿੱਚ ਆਟੋਫੈਜੀ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ [53] ਦੇ ਸਰਗਰਮ ਹੋਣ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਐਨ. ਕੈਨਿਨਮ ਲਈ, NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਸਪੀਸੀਜ਼-ਵਿਚੋਲਗੀ ਸਰਗਰਮੀ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਵਿੱਚ ਇਸਦੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਇਲਾਜ ਦਾ ਟੀਚਾ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ [9]।ਪੈਰਾਕੋਸੀਡੀਓਇਡਜ਼ ਬ੍ਰਾਸੀਲੀਏਨਸਿਸ ਨੂੰ ਮਾਊਸ ਬੋਨ ਮੈਰੋ-ਪ੍ਰਾਪਤ ਡੈਨਡ੍ਰਾਇਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਭੜਕਾਊ ਸਾਈਟੋਕਾਈਨ IL-1β ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਰੱਖਿਆ [10] ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਐਲ. ਐਮਾਜ਼ੋਨੇਸਿਸ, ਐਲ. ਮੇਜਰ, ਐਲ. ਬ੍ਰਾਜ਼ੀਲੀਅਨਸਿਸ, ਅਤੇ ਐਲ. ਇਨਫੈਂਟਮ ਚਗਾਸੀ ਸਮੇਤ ਕਈ ਲੀਸ਼ਮੈਨੀਆ ਸਪੀਸੀਜ਼, ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਵਿੱਚ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਅਤੇ ਏਐਸਸੀ-ਨਿਰਭਰ ਕੈਸਪੇਸ-1 ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ ਦੀ ਲਾਗ।NLRP3/ASC/caspase-1 ਜੀਨ [11] ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦੀ ਘਾਟ ਵਿੱਚ ਪੈਰਾਸਾਈਟ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਜ਼ੈਂਬੋਨੀ ਐਟ ਅਲ.ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ ਦੀ ਲਾਗ ਨੂੰ ਮੈਕਰੋਫੈਜਾਂ ਵਿੱਚ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੇ ਸਰਗਰਮ ਹੋਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜੋ ਅੰਦਰੂਨੀ ਪਰਜੀਵੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਨੂੰ ਸੀਮਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ ਇੱਕ ਬਚਣ ਦੀ ਰਣਨੀਤੀ ਵਜੋਂ NLRP3 ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਵਿਵੋ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ, NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੇ ਲੀਸ਼ਮੈਨਿਆ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਇਆ, ਪਰ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ [54]।ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਹੈਲਮਿੰਥਿਆਸਿਸ ਦੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ, NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੇ ਗੈਸਟਰੋਇੰਟੇਸਟਾਈਨਲ ਹੈਲਮਿੰਥਿਆਸਿਸ [12] ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਹੋਸਟ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਨੂੰ ਦਬਾ ਦਿੱਤਾ।ਸ਼ਿਗੇਲਾ ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਵਿੱਚ ਦਸਤ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਨ ਵਾਲੇ ਮੁੱਖ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ।ਇਹ ਬੈਕਟੀਰੀਆ P2X7 ਰੀਸੈਪਟਰ-ਮੀਡੀਏਟਿਡ K+ ਐਫਲਕਸ, ਰੀਐਕਟਿਵ ਆਕਸੀਜਨ ਸਪੀਸੀਜ਼, ਲਾਈਸੋਸੋਮਲ ਐਸਿਡੀਫਿਕੇਸ਼ਨ, ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਨੁਕਸਾਨ ਰਾਹੀਂ IL-1β ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਫੇਗੋਸਾਈਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਸ਼ੀਗੇਲਾ [55] ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਦੀ ਬੈਕਟੀਰੀਆਨਾਸ਼ਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਪਲਾਜ਼ਮੋਡੀਅਮ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਪਲਾਜ਼ਮੋਡੀਅਮ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ AIM2, NLRP3 ਜਾਂ ਕੈਸਪੇਸ-1 ਦੀ ਘਾਟ ਵਾਲੇ ਚੂਹੇ ਟਾਈਪ 1 ਇੰਟਰਫੇਰੋਨ ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰ ਪੈਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮੋਡੀਅਮ ਦੀ ਲਾਗ [56] ਪ੍ਰਤੀ ਵਧੇਰੇ ਰੋਧਕ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ NLRP3 ਸੋਜਸ਼ ਦੇ ਜਰਾਸੀਮ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡੀਨ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਅਸਪਸ਼ਟ ਹੈ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, MCC950 ਦੁਆਰਾ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਨੇ BW ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਅਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਆਂਦਰਾਂ ਦੇ ਲੇਵੇਜ ਤਰਲ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਕੀਤਾ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਡਿਊਡੀਨਲ ਟਿਸ਼ੂ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਗੰਭੀਰ ਰੋਗ ਸੰਬੰਧੀ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ।ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡਾਈਨ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਮਾਊਸ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਮਾਊਸ ਦੇ ਸਰੀਰ ਦਾ ਭਾਰ ਵਧਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਲੇਵੇਜ ਤਰਲ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰੋਫੋਜ਼ੋਇਟਸ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਪੈਥੋਲੋਜੀਕਲ ਡੂਓਡੇਨਲ ਜਖਮਾਂ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ G. duodenalis NLRP3 ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਨੂੰ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਗਿਆਰਡੀਨ ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7,3 ਗਿਆਰਡੀਨ ਰਾਹੀਂ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਜੀ. ਡੂਓਡੇਨਲਿਸ ਦੀ ਜਰਾਸੀਮ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਮੂਹਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਅਲਫ਼ਾ-2 ਅਤੇ ਅਲਫ਼ਾ-7.3 ਗਿਅਰਡਾਈਨਜ਼ NLRP3 ਹੋਸਟ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ G. duodenalis ਦੀ ਲਾਗ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਇਹ ਅਣੂ giardiasis ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਲਈ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਟੀਚੇ ਹਨ.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
ਲਿਆਂਗ ਏਕੇਐਸ, ਲਿਆਂਗ ਏਏਐਮ, ਹੁਆਂਗ ਏਐਚਸੀ, ਸਰਗੀ ਕੇਐਮ, ਕਾਮ ਜੇਕੇਐਮ।Giardiasis: ਇੱਕ ਸੰਖੇਪ ਜਾਣਕਾਰੀ.ਇਹ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਸਾਹਮਣੇ ਆਇਆ ਸੀ ਕਿ ਪੈਟ ਇਨਫਲਾਮ ਨੂੰ ਦਵਾਈਆਂ ਤੋਂ ਐਲਰਜੀ ਹੈ।2019; 13:134–43।
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: ਫਾਰਮਾੈਕੋਥੈਰੇਪੀ ਦੀ ਸਮੀਖਿਆ.ਇੱਕ ਫਾਰਮਾਸਿਸਟ ਦੀ ਮਾਹਰ ਰਾਏ.2007;8: 1885-902।
ਤਿਆਨ ਹੁਫੇਂਗ, ਚੇਨ ਬਿਨ, ਵੇਨ ਜਿਆਨਫੇਂਗ।Giardiasis, ਡਰੱਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਅਤੇ ਨਵੇਂ ਟੀਚਿਆਂ ਦੀ ਖੋਜ.ਡਿਸਆਰਡਰ ਡਰੱਗ ਟੀਚਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।2010;10:295-302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, ਆਦਿ NLRP3 ਜਲਣਸ਼ੀਲ ਅਤੇ ਸੋਜਸ਼ ਰੋਗ।ਆਕਸਾਈਡ ਮੇਡ ਸੈੱਲ Longev.2020;2020:4063562।
ਚੇਨ ਜੀ.ਵਾਈ., ਨੁਨੇਜ਼ ਜੀ. ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੀ ਸੋਜ ਅਤੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ।ਗੈਸਟ੍ਰੋਐਂਟਰੌਲੋਜੀ.2011;141:1986-99.
ਪੇਲੇਗ੍ਰਿਨੀ ਸੀ, ਐਂਟੋਨੀਓਲੀ ਐਲ, ਲੋਪੇਜ਼-ਕੈਸਟੇਜੋਨ ਜੀ, ਬਲਾਂਡੀਜ਼ੀ ਸੀ, ਫੋਰਨਾਈ ਐਮ. ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਅਤੇ ਅਟੈਪੀਕਲ ਐਨਐਲਆਰਪੀ3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਇਮਿਊਨ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੀ ਸੋਜਸ਼ ਦੇ ਚੁਰਾਹੇ 'ਤੇ।ਪ੍ਰੀ-ਇਮਿਊਨ.2017; 8:36।
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-ਵਿਚੋਲੇ NLRP3 ਇਨਫਲਾਮੇਸੋਮ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ N. ਕੈਨਿਨਮ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਪੈਰਾਸਾਈਟ ਵੈਕਟਰ।2020; 13:449।