Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਤੁਹਾਡਾ ਧੰਨਵਾਦ।ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਸੀਮਿਤ CSS ਸਮਰਥਨ ਹੈ।ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਮਰਥਨ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜਾਵਾ ਸਕ੍ਰਿਪਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਰੈਂਡਰ ਕਰਾਂਗੇ।
ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਇੱਕ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰੋਟੋਜ਼ੋਆਨ ਪੈਰਾਸਾਈਟ ਹੈ ਜੋ ਸੰਕਰਮਿਤ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋ-ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬ੍ਰੇਨ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੀਆਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੋਣ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਤੋਂ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miRNA-21 ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ BV2 ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਦੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀਕਰਨ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।Exosomal microRNA ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਾਂ ਦਾ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਦੀ ਛਾਂਟੀ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ-21A-5p ਦੀਆਂ ਐਰੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਅਸੀਂ Exosomes ਵਿੱਚ miR-21 ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਟਿਊਮਰ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ ਦੇ mRNA ਪੱਧਰਾਂ ਅਤੇ ਮਨੁੱਖੀ U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ 'ਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਵੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਵਿੱਚ, ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ -21 ਦਾ ਪ੍ਰਗਟਾਵਾ ਵਧਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਜੀਨਾਂ (ਫੌਕਸਓ 1, ਪੀਟੀਈਐਨ, ਅਤੇ ਪੀਡੀਸੀਡੀ 4) ਦੀ ਗਤੀਵਿਧੀ ਘਟਾਈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮ U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।Exosomes ਮਾਊਸ ਟਿਊਮਰ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਅਸੀਂ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ BV2 ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵਿੱਚ ਵਧਿਆ ਹੋਇਆ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miR-21 ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਵਿਕਾਸ ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਵਜੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿ 2018 ਵਿੱਚ ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਵਿੱਚ ਐਡਵਾਂਸਡ ਕੈਂਸਰ ਦੇ 18.1 ਮਿਲੀਅਨ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੇਸਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਹਰ ਸਾਲ ਲਗਭਗ 297,000 ਕੇਂਦਰੀ ਨਸ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਦੇ ਟਿਊਮਰਾਂ ਦਾ ਨਿਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਸਾਰੇ ਟਿਊਮਰਾਂ ਦਾ 1.6%)1।ਪਿਛਲੀ ਖੋਜ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਜੋਖਮ ਦੇ ਕਾਰਕਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰਸਾਇਣਕ ਉਤਪਾਦ, ਪਰਿਵਾਰਕ ਇਤਿਹਾਸ, ਅਤੇ ਸਿਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਅਤੇ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਉਪਕਰਣਾਂ ਤੋਂ ਆਇਨਾਈਜ਼ਿੰਗ ਰੇਡੀਏਸ਼ਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ ਖਤਰਨਾਕ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦਾ ਸਹੀ ਕਾਰਨ ਅਣਜਾਣ ਹੈ.ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਦੇ ਸਾਰੇ ਕੈਂਸਰਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਲਗਭਗ 20% ਵਾਇਰਸ, ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਅਤੇ ਪਰਜੀਵੀਆਂ ਸਮੇਤ ਛੂਤ ਵਾਲੇ ਕਾਰਕਾਂ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਛੂਤ ਵਾਲੇ ਜਰਾਸੀਮ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲ ਦੇ ਜੈਨੇਟਿਕ ਵਿਧੀਆਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਡੀਐਨਏ ਮੁਰੰਮਤ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਗੰਭੀਰ ਸੋਜਸ਼ ਅਤੇ ਇਮਿਊਨ ਸਿਸਟਮ ਨੂੰ ਨੁਕਸਾਨ ਪਹੁੰਚਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਮਨੁੱਖੀ ਕੈਂਸਰ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਛੂਤ ਵਾਲੇ ਏਜੰਟ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਵਾਇਰਲ ਜਰਾਸੀਮ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮਨੁੱਖੀ ਪੈਪੀਲੋਮਾਵਾਇਰਸ ਅਤੇ ਹੈਪੇਟਾਈਟਸ ਬੀ ਅਤੇ ਸੀ ਵਾਇਰਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਪਰਜੀਵੀ ਮਨੁੱਖੀ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਵੀ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਕਈ ਪਰਜੀਵੀ ਸਪੀਸੀਜ਼, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਕਿਸਟੋਸੋਮਾ, ਓਪੀਸ਼ੋਰਚਿਸ ਵਿਵੇਰਿਨੀ, ਓ. ਫੇਲੀਨਿਅਸ, ਕਲੋਨੋਰਚਿਸ ਸਾਈਨੇਨਸਿਸ ਅਤੇ ਹਾਈਮੇਨੋਲੇਪਿਸ ਨਾਨਾ, ਮਨੁੱਖੀ ਕੈਂਸਰ ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ 6,7,8 ਵਿੱਚ ਫਸੀਆਂ ਹੋਈਆਂ ਹਨ।
ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਇੱਕ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਪ੍ਰੋਟੋਜ਼ੋਆਨ ਹੈ ਜੋ ਸੰਕਰਮਿਤ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋ-ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਪਰਜੀਵੀ ਦੁਨੀਆ ਦੀ ਲਗਭਗ 30% ਆਬਾਦੀ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਨ ਦਾ ਅਨੁਮਾਨ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਸਾਰੀ ਆਬਾਦੀ 9,10 ਨੂੰ ਖਤਰੇ ਵਿੱਚ ਪਾ ਰਹੀ ਹੈ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਕੇਂਦਰੀ ਤੰਤੂ ਪ੍ਰਣਾਲੀ (ਸੀਐਨਐਸ) ਸਮੇਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਅੰਗਾਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਘਾਤਕ ਮੈਨਿਨਜਾਈਟਿਸ ਅਤੇ ਇਨਸੇਫਲਾਈਟਿਸ ਵਰਗੀਆਂ ਗੰਭੀਰ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਮਿਊਨੋਕੰਪਰੋਮਾਈਜ਼ਡ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ9।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਇਮਿਊਨੋ-ਸਮਰੱਥ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਕੇ ਸੰਕਰਮਿਤ ਹੋਸਟ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਵੀ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਇੱਕ ਅਸਿਮਟੋਮੈਟਿਕ ਕ੍ਰੋਨਿਕ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ 9,11 ਦੀ ਦੇਖਭਾਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਦੇ ਪ੍ਰਚਲਨ ਅਤੇ ਬ੍ਰੇਨ ਟਿਊਮਰ ਦੀਆਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਨੂੰ ਦੇਖਦੇ ਹੋਏ, ਕੁਝ ਰਿਪੋਰਟਾਂ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀਆਂ ਹਨ ਕਿ ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਦੀ ਲਾਗ ਦੇ ਕਾਰਨ ਵਿਵੋ ਹੋਸਟ ਵਾਤਾਵਰਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਟਿਊਮਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋ ਇਨਵਾਇਰਨਮੈਂਟ ਨਾਲ ਮਿਲਦੀਆਂ-ਜੁਲਦੀਆਂ ਹਨ।
Exosomes ਨੂੰ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਕਮਿਊਨੀਕੇਟਰ ਵਜੋਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਸਮੱਗਰੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਸਮੇਤ, ਗੁਆਂਢੀ ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ 16,17।ਐਕਸੋਸੋਮ ਟਿਊਮਰ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਟਿਊਮਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋ ਐਨਵਾਇਰਮੈਂਟ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀ-ਐਪੋਪੋਟੋਸਿਸ, ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ, ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ।ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, miRNAs (miRNAs), ਛੋਟੇ ਗੈਰ-ਕੋਡਿੰਗ RNAs ਲਗਭਗ 22 ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਲੰਬਾਈ ਵਿੱਚ, ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪੋਸਟ-ਟਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਜੀਨ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਹਨ ਜੋ miRNA-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸਾਈਲੈਂਸਿੰਗ ਕੰਪਲੈਕਸ (miRISC) ਦੁਆਰਾ ਮਨੁੱਖੀ mRNA ਦੇ 30% ਤੋਂ ਵੱਧ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਲਾਗ ਵਾਲੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨਾਂ ਵਿੱਚ miRNA ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਕੇ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹੋਸਟ miRNAs ਵਿੱਚ ਪੈਰਾਸਾਈਟ ਦੇ ਬਚਾਅ ਦੀ ਰਣਨੀਤੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਹੋਸਟ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਸੰਕੇਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਨਾਲ ਲਾਗ ਹੋਣ 'ਤੇ ਹੋਸਟ miRNA ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨਾ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਅਤੇ ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਆਪਸੀ ਤਾਲਮੇਲ ਨੂੰ ਹੋਰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਸਾਡੀ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਦਰਅਸਲ, ਤਿਰੂਗਨਨਮ ਐਟ ਅਲ.15 ਨੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਕਿ ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਖਾਸ ਮੇਜ਼ਬਾਨ miRNAs 'ਤੇ ਆਪਣੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਬਦਲ ਕੇ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਕਾਰਸੀਨੋਜੇਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪਾਇਆ ਕਿ ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਜਾਨਵਰਾਂ ਵਿੱਚ ਗਲੋਮਾ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ BV2 ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਹੋਸਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵਿੱਚ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miR-21 ਦੀ ਤਬਦੀਲੀ 'ਤੇ ਕੇਂਦ੍ਰਤ ਹੈ।ਅਸੀਂ FoxO1/p27 ਦੇ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਧਾਰਨ ਦੇ ਕਾਰਨ U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਵਿੱਚ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miR-21 ਦੀ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਦੇਖਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸਡ miR-21 ਦਾ ਟੀਚਾ ਹੈ।
BV2 ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਐਕਸੋਸੋਮ ਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਅਲ ਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਕੰਪੋਨੈਂਟਸ ਜਾਂ ਹੋਰ ਵੇਸਿਕਲਾਂ ਨਾਲ ਗੰਦਗੀ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।SDS-polyacrylamide ਜੈੱਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ (SDS-PAGE) ਨੇ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ (ਚਿੱਤਰ 1A) ਤੋਂ ਕੱਢੇ ਗਏ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਵੱਖਰੇ ਪੈਟਰਨ ਦਿਖਾਏ, ਅਤੇ ਐਲਿਕਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਲਈ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਜਿਸਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਐਕਸੋਸੋਮਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਮਾਰਕਰਾਂ ਦੇ ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਲਿਕਸ ਲੇਬਲਿੰਗ ਐਕਸੋਸੋਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿੱਚ ਪਾਈ ਗਈ ਸੀ ਪਰ BV2 ਸੈੱਲ ਲਾਈਸੇਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਚਿੱਤਰ 1B) ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, BV2 ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਆਰਐਨਏ ਦਾ ਬਾਇਓਐਨਲਾਈਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।18S ਅਤੇ 28S ਰਿਬੋਸੋਮਲ ਸਬਯੂਨਿਟ ਨੂੰ ਐਕਸੋਸੋਮਲ ਆਰਐਨਏ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਪੈਟਰਨ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਹੀ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਭਰੋਸੇਯੋਗ ਸ਼ੁੱਧਤਾ (ਚਿੱਤਰ 1C) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਨਿਰੀਖਣ ਕੀਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮ ਲਗਭਗ 60-150 nm ਆਕਾਰ ਦੇ ਸਨ ਅਤੇ ਇੱਕ ਕੱਪ ਵਰਗੀ ਬਣਤਰ ਸੀ ਜੋ ਐਕਸੋਸੋਮ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ (ਚਿੱਤਰ 1D) ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਸੀ।
BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ।(ਏ) ਸੁਰੱਖਿਆ ਡੇਟਾ ਸ਼ੀਟ ਪੰਨਾ।ਪ੍ਰੋਟੀਨ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਜਾਂ BV2 ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਐਕਸੋਸੋਮ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੈਟਰਨ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਵੱਖਰੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।(ਬੀ) ਇੱਕ ਐਕਸੋਸੋਮਲ ਮਾਰਕਰ (ਐਲਿਕਸ) ਦਾ ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ।(C) ਇੱਕ ਬਾਇਓਐਨਲਾਈਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ BV2 ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮ ਤੋਂ ਸ਼ੁੱਧ ਆਰਐਨਏ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ 18S ਅਤੇ 28S ਰਿਬੋਸੋਮਲ ਸਬਯੂਨਿਟ ਐਕਸੋਸੋਮਲ ਆਰਐਨਏ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਹੀ ਪਾਏ ਗਏ ਸਨ।(ਡੀ) ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮ 2% ਯੂਰੇਨਾਇਲ ਐਸੀਟੇਟ ਨਾਲ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਧੱਬੇ ਹੋਏ ਸਨ।Exosomes ਲਗਭਗ 60-150 nm ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਕੱਪ ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ (ਗੀਤ ਅਤੇ ਜੰਗ, ਅਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਡੇਟਾ)।
U87 ਮਨੁੱਖੀ ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਸੈਲੂਲਰ ਅੰਦਰੂਨੀਕਰਨ ਨੂੰ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।PKH26 ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਐਕਸੋਸੋਮ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮ ਵਿੱਚ ਸਥਾਨਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ DAPI (Fig. 2A) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮ ਹੋਸਟ ਸੈੱਲਾਂ ਦੁਆਰਾ ਅੰਦਰੂਨੀ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਪਤਕਰਤਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦਾ ਅੰਦਰੂਨੀਕਰਨ ਅਤੇ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ RH ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮ U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰਿਤ ਪ੍ਰਸਾਰ।(ਏ) ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ ਮਾਪੇ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਦੁਆਰਾ ਘੇਰੇ ਗਏ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼।U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ PKH26 (ਲਾਲ) ਨਾਲ ਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਜਾਂ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਨਿਯੰਤਰਣ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ DAPI (ਨੀਲੇ) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (ਸਕੇਲ ਬਾਰ: 10 μm, x 3000) ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।(ਬੀ) U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਪਰਖ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਸੰਕੇਤ ਸਮੇਂ ਲਈ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *ਪੀ <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪੀ <0.05। *ਪੀ <0.05 通过学生t 检验获得. *ਪੀ <0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀਕਰਨ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਅਸੀਂ ਮਨੁੱਖੀ ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ BV2-ਉਤਪੰਨ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਸ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਅਸੈਸ ਕੀਤੇ।ਟੀ. ਗੋਂਡੀ-ਸੰਕਰਮਿਤ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਵਾਲੇ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਇਲਾਜ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਟੀ. ਗੋਂਡੀ-ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਨਿਯੰਤਰਣ (ਚਿੱਤਰ 2B) ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਵਿੱਚ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਸਾਰ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, U118 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਨਤੀਜੇ U87 ਦੇ ਸਮਾਨ ਸਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਉਤੇਜਿਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਫੈਲਣ ਦੇ ਉੱਚੇ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ (ਡਾਟਾ ਨਹੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ)।ਇਹਨਾਂ ਡੇਟਾ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ, ਅਸੀਂ ਇਹ ਸੰਕੇਤ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਕਿ BV2-ਉਤਪੰਨ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ Xenograft ਮਾਡਲ ਲਈ U87 ਗਲਾਈਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਨਗਨ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਅਤੇ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮ ਜਾਂ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦਾ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ।1 ਹਫ਼ਤੇ ਬਾਅਦ ਟਿਊਮਰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, 5 ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਹਰੇਕ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਨੂੰ ਉਸੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਆਕਾਰ 22 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
U87 xenograft ਮਾਡਲ ਵਾਲੇ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਦਿਨ 22 (ਚਿੱਤਰ 3A,B) ਵਿੱਚ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਡੇ ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਭਾਰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਐਕਸੋਸੋਮ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਗਰੁੱਪ ਅਤੇ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਵਿਚਕਾਰ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਟੀਕੇ ਲਗਾਏ ਗਏ ਚੂਹਿਆਂ ਨੇ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ (ਚਿੱਤਰ 3C) ਦੇ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡੀ ਟਿਊਮਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਇੱਕ ਮਾਊਸ ਟਿਊਮਰ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਗਲੀਓਮਾ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।
U87 xenograft ਮਾਊਸ ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਸ ਦਾ ਓਨਕੋਜੀਨੇਸਿਸ (AC).ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਆਕਾਰ (A) ਅਤੇ ਭਾਰ (B) BV2 ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ BALB/c ਨਗਨ ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।BALB/c ਨਗਨ ਚੂਹੇ (C) ਨੂੰ ਮੈਟ੍ਰਿਗੇਲ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਮੁਅੱਤਲ 1 x 107 U87 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਚਮੜੀ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਟੀਕੇ ਤੋਂ ਛੇ ਦਿਨ ਬਾਅਦ, ਚੂਹਿਆਂ ਵਿੱਚ 100 μg BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਦਾ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਭਾਰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਦਿਨਾਂ ਅਤੇ ਕੁਰਬਾਨੀ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। *ਪੀ <0.05। *ਪੀ <0.05। *R <0,05। *ਪੀ <0.05। *ਪੀ <0.05। *ਪੀ <0.05। *R <0,05। *ਪੀ <0.05।
ਡੇਟਾ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕਤਾ ਜਾਂ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ 37 miRNAs (16 ਓਵਰਐਕਸਪ੍ਰੈਸਡ ਅਤੇ 21 ਡਾਊਨ ਐਕਸਪ੍ਰੈਸਡ) ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਆਰਐਚ ਸਟ੍ਰੇਨ (ਚਿੱਤਰ 4A) ਨਾਲ ਲਾਗ ਦੇ ਬਾਅਦ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਬਦਲ ਗਏ ਸਨ।ਬਦਲੇ ਹੋਏ miRNAs ਵਿੱਚ miR-21 ਦੇ ਸਾਪੇਖਿਕ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ BV2, BV2 ਅਤੇ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਐਕਸੋਸੋਮਸ ਵਿੱਚ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ RT-PCR ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।miR-21 ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੇ Toxoplasma gondii (RH ਸਟ੍ਰੇਨ) (Fig. 4B) ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਤੋਂ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ।BV2 ਅਤੇ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ miR-21 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ (ਚਿੱਤਰ 4B) ਦੇ ਗ੍ਰਹਿਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਵਧੇ।ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਅਤੇ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ (ME49 ਸਟ੍ਰੇਨ) ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ miR-21 ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਪੱਧਰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 4C).ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਵਿਟਰੋ ਅਤੇ ਵੀਵੋ ਵਿੱਚ ਪੂਰਵ ਅਨੁਮਾਨ ਅਤੇ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰ ਨਾਲ ਸਬੰਧ ਰੱਖਦੇ ਹਨ।
Toxoplasma gondii (RH) ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵਿੱਚ exosomal miP-21a-5p ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ।(ਏ) ਟੀ. ਗੋਂਡੀ ਆਰਐਚ ਦੀ ਲਾਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇਮਿਊਨਿਟੀ ਜਾਂ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ siRNA ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।(ਬੀ) BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਸ, BV2-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼, ਅਤੇ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ RT-PCR ਦੁਆਰਾ ਸੰਬੰਧਿਤ miR-21 ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।(C) ਰਿਸ਼ਤੇਦਾਰ miR-21 ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰ ਟਿਊਮਰ ਮਰੀਜ਼ਾਂ (N=3) ਅਤੇ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ (ME49 ਸਟ੍ਰੇਨ) (N=3) ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਗਏ ਸਨ। *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *ਪੀ < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *ਪੀ <0.05 通过学生t 检验获得. *ਪੀ <0.05 * ਪੀ <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਨੇ ਵਿਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ (ਚਿੱਤਰ 2, 3) ਵਿੱਚ ਗਲੀਓਮਾਸ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੀ ਅਗਵਾਈ ਕੀਤੀ।ਸੰਬੰਧਿਤ mRNAs ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ BV2 ਜਾਂ RH BV2 ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ U87 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨਾਂ, ਫੋਰਕਹੈੱਡ ਬਾਕਸ O1 (FoxO1), PTEN, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮਡ ਸੈੱਲ ਡੈਥ 4 (PDCD4) ਦੇ mRNA ਪੱਧਰਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।ਬਾਇਓਇਨਫੋਰਮੈਟਿਕਸ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਕਈ ਟਿਊਮਰ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ, ਫੌਕਸਓ1, ਪੀਟੀਈਐਨ, ਅਤੇ ਪੀਡੀਸੀਡੀ 4 ਜੀਨਾਂ ਸਮੇਤ, ਵਿੱਚ miR-2121,22 ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਹਨ।BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ (ਚਿੱਤਰ 5A) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਸ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਟਾਰਗੇਟ ਜੀਨਾਂ ਦੇ mRNA ਪੱਧਰ ਘਟਾਏ ਗਏ ਸਨ।FoxO1 ਨੇ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ (ਚਿੱਤਰ 5B) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ, ਅਸੀਂ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਕਿ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2 ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਐਕਸੋਸੋਮ ਐਂਟੀ-ਆਨਕੋਜੇਨਿਕ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਕਾਇਮ ਰੱਖਦੇ ਹਨ।
ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ RH- ਸੰਕਰਮਿਤ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੁਆਰਾ U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਂਟੀਟਿਊਮਰ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।(ਏ) PBS ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ T. ਗੋਂਡੀ RH-ਇਨਫੈਕਟਡ BV2 ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਵਿੱਚ FoxO1, PTEN ਅਤੇ PDCD4 ਸਮੀਕਰਨ ਦਾ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ PCR।β-actin mRNA ਇੱਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ.(ਬੀ) ਫੌਕਸਓ 1 ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਛਮੀ ਬਲੋਟਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਮੇਜਜੇ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਡੈਨਸੀਟੋਮੈਟਰੀ ਡੇਟਾ ਦਾ ਅੰਕੜਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ ਟੈਸਟ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *ਪੀ < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। *ਪੀ <0.05 通过学生t 检验获得. *ਪੀ <0.05 * ਪੀ <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਟਿਊਮਰ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨ ਰੈਗੂਲੇਸ਼ਨ 'ਤੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਵਿੱਚ miP-21 ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ, U87 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ Lipofectamine 2000 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ miP-21 ਦੇ ਇੱਕ ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ 24 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।miR-21 ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ FoxO1 ਅਤੇ p27 ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ qRT-PCR (Fig. 6A,B) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।U87 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ miR-21 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਦੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਨੇ FoxO1 ਅਤੇ p27 ਸਮੀਕਰਨ (FIG. 6) ਨੂੰ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।
RH- ਸੰਕਰਮਿਤ ਐਕਸੋਸੋਮਲ BV2-ਉਤਪੰਨ miP-21 ਨੇ U87 ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ FoxO1/p27 ਸਮੀਕਰਨ ਬਦਲਿਆ।U87 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ Lipofectamine 2000 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ miP-21 ਇਨਿਹਿਬਟਰ ਨਾਲ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ 24 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।miR-21 ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ ਨਾਲ ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ FoxO1 ਅਤੇ p27 ਸਮੀਕਰਨ ਪੱਧਰਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ qRT-PCR (A, B) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BV2-ਉਤਪੰਨ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ, ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਪਰਜੀਵੀ ਟਿਸ਼ੂ ਗੱਠ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਉਹ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਦੇ ਪੂਰੇ ਜੀਵਨ ਕਾਲ ਦੌਰਾਨ ਦਿਮਾਗ, ਦਿਲ ਅਤੇ ਪਿੰਜਰ ਦੀਆਂ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀਆਂ ਸਮੇਤ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਪਰਜੀਵੀ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਸੋਧਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਉਹ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਅਤੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ 14,24.ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਡੈਂਡਰਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ, ਨਿਊਟ੍ਰੋਫਿਲਸ, ਅਤੇ ਮੋਨੋਸਾਈਟ/ਮੈਕ੍ਰੋਫੇਜ ਵੰਸ਼ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਐਮ 2 ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਦੇ ਮੈਕਰੋਫੈਜ ਦੇ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਰਾਸੀਮ ਦੀ ਲਾਗ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਜ਼ਖ਼ਮ ਦੇ ਇਲਾਜ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਹਾਈਪਰਵੈਸਕੁਲਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਗ੍ਰੈਨਿਊਲੋਮੇਟਸ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਨਾਲ ਵੀ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਦਾ ਇਹ ਵਿਵਹਾਰਕ ਜਰਾਸੀਮ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਮਾਰਕਰਾਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਵਿਰੋਧੀ ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਨੁਸਾਰੀ ਪ੍ਰੀਕੈਂਸਰ ਵਰਗਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਲਈ, ਇਹ ਮੰਨਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਨੂੰ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.ਵਾਸਤਵ ਵਿੱਚ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬ੍ਰੇਨ ਟਿਊਮਰ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਸੀਰਮ ਵਿੱਚ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਦੀਆਂ ਉੱਚ ਦਰਾਂ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਇੱਕ ਹੋਰ ਕਾਰਸੀਨੋਜਨਿਕ ਪ੍ਰਭਾਵਕ ਹੋ ​​ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹੋਰ ਛੂਤ ਵਾਲੇ ਕਾਰਸੀਨੋਜਨਾਂ ਨੂੰ ਦਿਮਾਗ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਵਿਕਸਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਨ ਲਈ ਸਹਿਯੋਗੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਸਬੰਧ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਪੀ ਫਾਲਸੀਪੇਰਮ ਅਤੇ ਐਪਸਟੀਨ-ਬਾਰ ਵਾਇਰਸ ਬਰਕਿਟ ਦੇ ਲਿਮਫੋਮਾ ਦੇ ਗਠਨ ਵਿੱਚ ਸਹਿਯੋਗੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਕੈਂਸਰ ਖੋਜ ਦੇ ਖੇਤਰ ਵਿੱਚ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ ਵਜੋਂ ਐਕਸੋਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਪਰਜੀਵੀਆਂ ਅਤੇ ਸੰਕਰਮਿਤ ਮੇਜ਼ਬਾਨਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਐਕਸੋਸੋਮ ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਝਿਆ ਨਹੀਂ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਹੁਣ ਤੱਕ, ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰਾਂ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਗੁਪਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਨੇ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੀ ਵਿਆਖਿਆ ਕੀਤੀ ਹੈ ਜਿਸ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੋਟੋਜ਼ੋਆਨ ਪਰਜੀਵੀ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਦੇ ਹਮਲੇ ਦਾ ਵਿਰੋਧ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਲਾਗ ਨੂੰ ਸਥਾਈ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਇੱਕ ਵਧ ਰਹੀ ਧਾਰਨਾ ਹੈ ਕਿ ਪ੍ਰੋਟੋਜ਼ੋਆਨ-ਸਬੰਧਤ ਮਾਈਕ੍ਰੋਵੇਸੀਕਲਸ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਬਚਾਅ ਲਈ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਵਾਤਾਵਰਣ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਗੱਲਬਾਤ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਬਦਲੇ ਹੋਏ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miRNAs ਅਤੇ ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਸਾਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ ਨੂੰ ਖੋਜਣ ਲਈ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ ਪਰਿਵਰਤਨ (ਕਲੱਸਟਰ ਜੀਨ miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ਅਤੇ miR-17-92) ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਮਨੁੱਖੀ ਮੈਕਰੋਫੈਜਾਂ ਵਿੱਚ STAT3 ਪ੍ਰਮੋਟਰ ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ, ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਵਿਰੋਧੀ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ। -ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ 29 ਦੇ ਜਵਾਬ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ miR-17-5p ਅਤੇ miR-106b-5p ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਕਈ ਹਾਈਪਰਪ੍ਰੋਲੀਫੇਰੇਟਿਵ ਬਿਮਾਰੀਆਂ 30 ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ ਹਨ।ਇਹ ਅੰਕੜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਹੋਸਟ miRNAs ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਵਿਵਹਾਰ ਵਿੱਚ ਪਰਜੀਵੀ ਬਚਾਅ ਅਤੇ ਜਰਾਸੀਮ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅਣੂ ਹਨ।
ਬਦਲੇ ਹੋਏ miRNAs ਘਾਤਕ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਤੀ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਗਲੀਓਮਾਸ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ: ਵਿਕਾਸ ਸੰਕੇਤਾਂ ਦੀ ਸਵੈ-ਨਿਰਭਰਤਾ, ਵਿਕਾਸ-ਰੋਕਣ ਵਾਲੇ ਸੰਕੇਤਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਅਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ, ਅਪੋਪਟੋਸਿਸ ਚੋਰੀ, ਅਸੀਮਤ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਸਮਰੱਥਾ, ਐਂਜੀਓਜੇਨੇਸਿਸ, ਹਮਲਾ ਅਤੇ ਮੈਟਾਸਟੇਸਿਸ, ਅਤੇ ਇਨਫਲਾਮਮ।ਗਲੀਓਮਾ ਵਿੱਚ, ਕਈ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਿੰਗ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲੇ ਹੋਏ miRNAs ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ।
ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ miRNA-21 ਸਮੀਕਰਨ ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰਾਂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਹੈ।miR-21 ਨੂੰ ਗਲੋਮਾਸ, 33 ਸਮੇਤ ਠੋਸ ਟਿਊਮਰਾਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਅਕਸਰ ਓਵਰਪ੍ਰੈਸਡ ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪਛਾਣਿਆ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦਾ ਸਮੀਕਰਨ ਗਲਿਓਮਾ ਦੇ ਗ੍ਰੇਡ ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ ਹੈ।ਇਕੱਠਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਸਬੂਤ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ miR-21 ਇੱਕ ਨਾਵਲ ਓਨਕੋਜੀਨ ਹੈ ਜੋ ਗਲੀਓਮਾ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਐਂਟੀ-ਐਪੋਪੋਟੋਟਿਕ ਕਾਰਕ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਦਿਮਾਗੀ ਖ਼ਤਰਨਾਕ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਅਤੇ ਪਲਾਜ਼ਮਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ miR-21 ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਕੈਸਪੇਸ-ਨਿਰਭਰ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦੇ ਕਾਰਨ ਸੈੱਲ ਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਦੀ ਹੈ।miR-21 ਪੂਰਵ-ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਟੀਚਿਆਂ ਦੇ ਬਾਇਓਇਨਫਾਰਮੈਟਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਮਾਰਗਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਕਈ ਟਿਊਮਰ ਸਪਰੈਸਰ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕੀਤਾ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮਡ ਸੈੱਲ ਡੈਥ 4 (PDCD4), ਟ੍ਰੋਪੋਮਾਇਓਸਿਨ (TPM1), PTEN, ਅਤੇ ਫੋਰਕਹੈੱਡ ਬਾਕਸ O1 (FoxO1), miR-2121 ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟ ਦੇ ਨਾਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।॥੨੨॥੩੮॥
FoxO1, ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਕਾਰਕਾਂ (FoxO) ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ, ਮਨੁੱਖੀ ਕੈਂਸਰ ਦੀਆਂ ਕਈ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ p21, p27, Bim, ਅਤੇ FasL40 ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।FoxO1 ਸੈੱਲ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਇਨਿਹਿਬਟਰਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ p27 ਨੂੰ ਬੰਨ੍ਹ ਅਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, FoxO1 PI3K/Akt ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਦਾ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਪ੍ਰਭਾਵਕ ਹੈ ਅਤੇ p2742 ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨ ਦੀ ਸਰਗਰਮੀ ਦੁਆਰਾ ਕਈ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਦੀ ਤਰੱਕੀ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, ਅਸੀਂ ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਤੋਂ ਲਿਆ ਗਿਆ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miR-21 ਗਲੋਮਾ ਸੈੱਲਾਂ (ਚਿੱਤਰ 7) ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਰੈਗੂਲੇਟਰ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਐਕਸੋਸੋਮਲ miR-21, ਬਦਲੀ ਹੋਈ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਲਾਗ, ਅਤੇ ਗਲੀਓਮਾ ਦੇ ਵਾਧੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਿੱਧਾ ਸਬੰਧ ਲੱਭਣ ਲਈ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਤੋਂ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਅਤੇ ਗਲੀਓਮਾ ਦੀਆਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧਾਂ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਿੰਦੂ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨ ਦੀ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਗਲੀਓਮਾ (ਦਿਮਾਗ) ਕਾਰਸੀਨੋਜਨੇਸਿਸ ਦੀ ਵਿਧੀ ਦਾ ਇੱਕ ਯੋਜਨਾਬੱਧ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ।ਲੇਖਕ ਪਾਵਰਪੁਆਇੰਟ 2019 (Microsoft, Redmond, WA) ਵਿੱਚ ਖਿੱਚਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ, ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸਮੇਤ, ਸਿਓਲ ਨੈਸ਼ਨਲ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਐਨੀਮਲ ਕੇਅਰ ਅਤੇ ਉਪਭੋਗਤਾ ਕਮੇਟੀ ਦੇ ਮਿਆਰੀ ਨੈਤਿਕ ਦਿਸ਼ਾ-ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸਨ ਅਤੇ ਸਿਓਲ ਨੈਸ਼ਨਲ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਸਕੂਲ ਆਫ਼ ਮੈਡੀਸਨ (IRB ਨੰਬਰ SNU-) ਦੇ ਸੰਸਥਾਗਤ ਸਮੀਖਿਆ ਬੋਰਡ ਦੁਆਰਾ ਮਨਜ਼ੂਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। 150715)।-2)।ਸਾਰੀਆਂ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ARRIVE ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ।
BV2 ਮਾਊਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਅਤੇ U87 ਮਨੁੱਖੀ ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲ ਡੁਲਬੇਕੋ ਦੇ ਮੋਡੀਫਾਈਡ ਈਗਲਜ਼ ਮਾਧਿਅਮ (DMEM; ਵੇਲਜੀਨ, ਸਿਓਲ, ਕੋਰੀਆ) ਅਤੇ ਰੋਸਵੇਲ ਪਾਰਕ ਮੈਮੋਰੀਅਲ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ ਦੇ ਮਾਧਿਅਮ (RPMI; ਵੇਲਜੀਨ) ਵਿੱਚ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਹਰੇਕ ਵਿੱਚ 10% ਭਰੂਣ ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ, m-4. ਗਲੂਟਾਮਾਈਨ, 0.2 ਐਮਐਮ ਪੈਨਿਸਿਲਿਨ ਅਤੇ 0.05 ਐਮਐਮ ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਨ।ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5% CO2 ਦੇ ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ ਹੋਰ ਗਲਿਓਮਾ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ, U118, U87 ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਲਈ ਵਰਤੀ ਗਈ ਸੀ।
T. gondii-infected RH ਅਤੇ ME49 ਸਟ੍ਰੇਨਾਂ ਤੋਂ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਲਈ, T. gondii tachyzoites (RH ਸਟ੍ਰੇਨ) ਦੀ ਕਟਾਈ 3-4 ਦਿਨ ਪਹਿਲਾਂ 6-ਹਫ਼ਤੇ ਪੁਰਾਣੇ BALB/c ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਪੇਟ ਦੇ ਖੋਲ ਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਟੈਚੀਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 40% ਪਰਕੋਲ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, ਐਮਓ, ਯੂਐਸਏ) 43 ਵਿੱਚ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਤਣਾਅ ME49 ਦੇ ਟੈਚਾਈਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, BALB/c ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ 20 ਟਿਸ਼ੂ ਸਿਸਟਾਂ ਨਾਲ ਅੰਦਰੂਨੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ (PI) ਦੇ ਬਾਅਦ 6-8ਵੇਂ ਦਿਨ ਪੇਟ ਦੇ ਖੋਲ ਨੂੰ ਧੋ ਕੇ ਸਿਸਟਾਂ ਵਿੱਚ ਟੈਚੀਜ਼ੋਇਟ ਪਰਿਵਰਤਨ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪੀਬੀਐਸ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹੇ।ME49 tachyzoites 100 μg/ml ਪੈਨਿਸਿਲਿਨ (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਨ (Gibco/BRL), ਅਤੇ 5% ਭਰੂਣ ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ (ਲੋਂਜ਼ਾ, ਵਾਕਰਸਵਿਲੇ, MD) ਨਾਲ ਪੂਰਕ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਉਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। .., USA) 37 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਅਤੇ 5% ਕਾਰਬਨ ਡਾਈਆਕਸਾਈਡ 'ਤੇ।ਵੇਰੋ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਸ਼ਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ME49 ਟੈਚੀਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਦੋ ਵਾਰ 25 ਗੇਜ ਦੀ ਸੂਈ ਰਾਹੀਂ ਅਤੇ ਫਿਰ ਮਲਬੇ ਅਤੇ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ 5 µm ਫਿਲਟਰ ਰਾਹੀਂ ਪਾਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਟੈਚੀਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਪੀਬੀਐਸ 44 ਵਿੱਚ ਮੁੜ ਮੁਅੱਤਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਗੋਂਡੀ ਸਟ੍ਰੇਨ ME49 ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਸਿਸਟਾਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ C57BL/6 ਚੂਹਿਆਂ (ਓਰੀਐਂਟ ਬਾਇਓ ਐਨੀਮਲ ਸੈਂਟਰ, ਸੀਓਂਗਨਾਮ, ਕੋਰੀਆ) ਦੇ ਦਿਮਾਗ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਗੱਠਿਆਂ ਦੇ ਇੰਟਰਾਪੇਰੀਟੋਨੀਅਲ ਇੰਜੈਕਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ME49- ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਦਿਮਾਗ PI ਦੇ 3 ਮਹੀਨਿਆਂ ਬਾਅਦ ਕੱਟੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਸਿਸਟਾਂ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਬਾਰੀਕ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸੰਕਰਮਿਤ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਸਿਓਲ ਨੈਸ਼ਨਲ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਸਕੂਲ ਆਫ਼ ਮੈਡੀਸਨ ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਰੋਗਾਣੂ ਮੁਕਤ ਹਾਲਤਾਂ (SPF) ਅਧੀਨ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕੁੱਲ RNA ਨੂੰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਿਦਾਇਤਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ miRNeasy ਮਿੰਨੀ ਕਿੱਟ (Qiagen, Hilden, Germany) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਸ, BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇਲਿਊਸ਼ਨ ਸਟੈਪ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਸਮਾਂ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ।ਆਰਐਨਏ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਇੱਕ NanoDrop 2000 ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ 'ਤੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਆਰਐਨਏ ਮਾਈਕ੍ਰੋਏਰੇਜ਼ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਇੱਕ Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
10% ਐਕਸੋਸੋਮ-ਗਰੀਬ FBS ਵਾਲਾ DMEM 100,000g 'ਤੇ 4°C 'ਤੇ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਅਲਟਰਾਸੈਂਟਰੀਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 0.22 µm ਫਿਲਟਰ (ਨਾਲਜੀਨ, ਰੋਚੈਸਟਰ, NY, USA) ਦੁਆਰਾ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।BV2 ਸੈੱਲ, 5 × 105, ਨੂੰ DMEM ਵਿੱਚ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 10% ਐਕਸੋਸੋਮ-ਡਿਲੀਟਿਡ FBS ਅਤੇ 1% ਐਂਟੀਬਾਇਓਟਿਕਸ 37°C ਅਤੇ 5% CO2 ਸਨ।24 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਟ੍ਰੇਨ RH ਜਾਂ ME49 (MOI = 10) ਦੇ ਟੈਚਾਈਜ਼ੋਇਟਸ ਨੂੰ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਹਮਲਾਵਰ ਪਰਜੀਵੀਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਘੰਟੇ ਦੇ ਅੰਦਰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ DMEM ਨਾਲ ਦੁਬਾਰਾ ਭਰਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।BV2 ਕੋਸ਼ਿਕਾਵਾਂ ਤੋਂ Exosomes ਨੂੰ ਸੋਧਿਆ ਹੋਇਆ ਡਿਫਰੈਂਸ਼ੀਅਲ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਤਰੀਕਾ।RNA ਜਾਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ 300 μl PBS ਵਿੱਚ ਐਕਸੋਸੋਮ ਪੈਲੇਟ ਨੂੰ ਮੁੜ-ਸਪੁਰਦ ਕਰੋ।ਅਲੱਗ-ਥਲੱਗ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੀ ਤਵੱਜੋ ਨੂੰ ਇੱਕ BCA ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਸੇ ਕਿੱਟ (ਪੀਅਰਸ, ਰੌਕਫੋਰਡ, IL, USA) ਅਤੇ ਇੱਕ NanoDrop 2000 ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
BV2 ਸੈੱਲਾਂ ਜਾਂ BV2 ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਨੂੰ PRO-PREP™ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਹੱਲ (iNtRon ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ, ਸੀਓਂਗਨਾਮ, ਕੋਰੀਆ) ਵਿੱਚ ਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਕੂਮਾਸੀ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦੇ 10% SDS ਪੋਲੀਐਕਰੀਲਾਮਾਈਡ ਜੈੱਲਾਂ ਉੱਤੇ ਲੋਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪੀਵੀਡੀਐਫ ਝਿੱਲੀ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਪੱਛਮੀ ਬਲੌਟਸ ਨੂੰ ਐਲਿਕਸ ਐਂਟੀਬਾਡੀ (ਸੈੱਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ, ਬੇਵਰਲੀ, ਐਮ.ਏ., ਯੂ.ਐਸ.ਏ.) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕ ਐਕਸੋਸੋਮਲ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।HRP-ਸੰਯੁਕਤ ਬੱਕਰੀ ਵਿਰੋਧੀ ਮਾਊਸ IgG (H + L) (ਬੈਥਾਈਲ ਲੈਬਾਰਟਰੀਜ਼, ਮੋਂਟਗੋਮਰੀ, TX, USA) ਅਤੇ ਇੱਕ LAS-1000 ਪਲੱਸ ਲਿਊਮਿਨਸੈਂਟ ਚਿੱਤਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕ (ਫੂਜੀ ਫੋਟੋਗ੍ਰਾਫਿਕ ਫਿਲਮ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਨੂੰ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।.ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।BV2 ਸੈੱਲਾਂ (6.40 µg/µl) ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ Exosomes ਨੂੰ ਕਾਰਬਨ-ਕੋਟੇਡ ਜਾਲੀਆਂ 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 1 ਮਿੰਟ ਲਈ 2% ਯੂਰੇਨਾਇਲ ਐਸੀਟੇਟ ਨਾਲ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਦਾਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨੇ ਇੱਕ ES1000W Erlangshen CCD ਕੈਮਰੇ (Gatan, Pleasanton, CA, USA) ਨਾਲ ਲੈਸ ਇੱਕ JEOL 1200-EX II (ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 80 kV ਦੀ ਇੱਕ ਤੇਜ਼ ਵੋਲਟੇਜ 'ਤੇ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸਨ।
ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 15 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ PKH26 ਰੈੱਡ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਲਿੰਕਰ ਕਿੱਟ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਚ, ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ BV2-ਪ੍ਰਾਪਤ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਨੂੰ ਦਾਗ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।U87 ਸੈੱਲ, 2×105, PKH26-ਲੇਬਲ ਵਾਲੇ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ (ਲਾਲ) ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕੋਈ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਨੂੰ 5% CO2 ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ ਵਿੱਚ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 37°C 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।U87 ਸੈੱਲ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ DAPI (ਨੀਲੇ) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, U87 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 4% ਪੈਰਾਫਾਰਮਲਡੀਹਾਈਡ ਵਿੱਚ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਵਿੱਚ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ Leica TCS SP8 STED CW ਕੰਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ ਸਿਸਟਮ (ਲੀਕਾ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਿਸਟਮ, ਮੈਨਹਾਈਮ, ਜਰਮਨੀ) ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਦੇਖਣਯੋਗ
cDNA ਨੂੰ siRNA ਤੋਂ Mir-X siRNA ਫਸਟ ਸਟ੍ਰੈਂਡ ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਅਤੇ SYBR qRT-PCR ਕਿੱਟ (ਟਕਾਰਾ ਬਾਇਓ ਇੰਕ., ਸ਼ਿਗਾ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।SYBR ਪ੍ਰੀਮਿਕਸ ਨਾਲ ਮਿਲਾਏ ਗਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ iQ5 ਰੀਅਲ ਟਾਈਮ ਪੀਸੀਆਰ ਖੋਜ ਪ੍ਰਣਾਲੀ (ਬਾਇਓ-ਰੈਡ, ਹਰਕੂਲੀਸ, CA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਅਸਲ ਸਮੇਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਪੀਸੀਆਰ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ 15 ਸਕਿੰਟ ਲਈ 95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਦੇ 40 ਚੱਕਰਾਂ ਲਈ ਅਤੇ 60 ਸੈਕਿੰਡ ਲਈ 60 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਐਨੀਲਿੰਗ ਲਈ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।IQ™5 ਆਪਟੀਕਲ ਸਿਸਟਮ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਬਾਇਓ-ਰੈਡ) ਦੇ ਡੇਟਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਮੋਡੀਊਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਹਰੇਕ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਡੇਟਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਚੁਣੇ ਹੋਏ ਟੀਚੇ ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਅਤੇ β-ਐਕਟਿਨ/siRNA (ਅਤੇ U6) ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਜੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿੱਚ ਸੰਬੰਧਿਤ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਮਿਆਰੀ ਕਰਵ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਵਰਤੇ ਗਏ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਨੂੰ ਸਾਰਣੀ 1 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।
3 x 104 U87 ਗਲੀਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 96-ਖੂਹ ਵਾਲੀਆਂ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ BV2 (50 μg/mL) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ-ਇਨਫੈਕਟਿਡ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਜਾਂ BV2 (50 μg/mL) ਤੋਂ ਲਏ ਗਏ ਗੈਰ-ਪਲਸ ਐਕਸੋਸੋਮਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ 12, 18 ਅਤੇ 18 ਘੰਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। .ਸੈੱਲ ਕਾਊਂਟਿੰਗ ਕਿੱਟ-8 (ਡੋਜਿੰਡੋ, ਕੁਮਾਮੋਟੋ, ਜਾਪਾਨ) (ਪੂਰਕ ਅੰਕੜੇ S1-S3) 46 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੈੱਲ ਫੈਲਣ ਦੀ ਦਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
5-ਹਫ਼ਤੇ ਦੀ ਉਮਰ ਦੀ ਮਾਦਾ BALB/c ਨਗਨ ਚੂਹੇ ਨੂੰ Orient Bio (Seongnam-si, South Korea) ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (22±2°C) ਅਤੇ ਨਮੀ (45±15°C) 'ਤੇ ਨਿਰਜੀਵ ਪਿੰਜਰਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।%) ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ (22±2°C) ਅਤੇ ਨਮੀ (45±15%) 'ਤੇ।ਐਸਪੀਐਫ (ਸਿਓਲ ਨੈਸ਼ਨਲ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਸਕੂਲ ਆਫ਼ ਮੈਡੀਸਨ ਐਨੀਮਲ ਸੈਂਟਰ) ਦੇ ਤਹਿਤ 12 ਘੰਟੇ ਦਾ ਲਾਈਟ ਚੱਕਰ ਅਤੇ 12 ਘੰਟੇ ਦਾ ਹਨੇਰਾ ਚੱਕਰ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ।ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਬੇਤਰਤੀਬੇ 5 ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਤਿੰਨ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ 400 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪੀਬੀਐਸ ਦੇ ਨਾਲ 1 x 107 U87 ਗਲਾਈਓਮਾ ਸੈੱਲਾਂ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਕਾਰਕ ਘਟਾਏ ਗਏ BD Matrigel™ (BD ਸਾਇੰਸ, ਮਿਆਮੀ, FL, USA) ਦੇ ਨਾਲ ਸਬਕੁਟੇਨਅਸ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਟੀਕੇ ਤੋਂ ਛੇ ਦਿਨ ਬਾਅਦ, BV2 ਸੈੱਲਾਂ (ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਦੀ ਲਾਗ ਦੇ ਨਾਲ/ਬਿਨਾਂ) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ 200 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਐਕਸੋਸੋਮ ਨੂੰ ਟਿਊਮਰ ਸਾਈਟ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਊਮਰ ਦੀ ਲਾਗ ਦੇ 22 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਚੂਹਿਆਂ ਦੇ ਟਿਊਮਰ ਦਾ ਆਕਾਰ ਹਫ਼ਤੇ ਵਿੱਚ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਇੱਕ ਕੈਲੀਪਰ ਨਾਲ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਟਿਊਮਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਫਾਰਮੂਲੇ ਦੁਆਰਾ ਗਿਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ: 0.5 × (ਚੌੜਾਈ) × 2 × ਲੰਬਾਈ।
miRCURYTM LNA miRNA ਐਰੇ, 7ਵੀਂ ਪੀੜ੍ਹੀ ਹੈ, mmu ਅਤੇ rno ਐਰੇ (EXIQON, Vedbaek, Denmark) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਮਾਈਕ੍ਰੋਆਰਐਨਏ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ 3100 ਮਨੁੱਖੀ, ਮਾਊਸ ਅਤੇ ਚੂਹਾ miRNA ਕੈਪਚਰ ਪੜਤਾਲਾਂ ਵਿੱਚ 1119 ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਾਲੇ ਚੂਹਿਆਂ ਨੂੰ ਕਵਰ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਕੁੱਲ RNA ਦੇ 250 ਤੋਂ 1000 ng ਨੂੰ 5′-ਫਾਸਫੇਟ ਤੋਂ ਵੱਛੇ ਦੀ ਆਂਦਰਾਂ ਦੇ ਖਾਰੀ ਫਾਸਫੇਟ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਦੁਆਰਾ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਬਾਅਦ Hy3 ਹਰੇ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਡਾਈ ਨਾਲ ਲੇਬਲਿੰਗ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਲੇਬਲ ਕੀਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਚੈਂਬਰ ਕਿੱਟ (ਐਜੀਲੈਂਟ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ, ਸੈਂਟਾ ਕਲਾਰਾ, ਸੀਏ, ਯੂਐਸਏ) ਅਤੇ ਇੱਕ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਸਲਾਈਡ ਕਿੱਟ (ਐਜਿਲੈਂਟ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀਜ਼) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਏਰੇ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਲੋਡ ਕਰਕੇ ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਾਈਬ੍ਰਿਡਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ 16 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 56 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਫਿਰ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਸਿਫ਼ਾਰਸ਼ਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਮਾਈਕ੍ਰੋਏਰੇ ਨੂੰ ਧੋ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰੋਸੈਸਡ ਮਾਈਕ੍ਰੋਏਰੇ ਸਲਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਇੱਕ Agilent G2565CA ਮਾਈਕ੍ਰੋਏਰੇ ਸਕੈਨਰ ਸਿਸਟਮ (Agilent Technologies) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸਕੈਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਸਕੈਨ ਕੀਤੇ ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੂੰ ਏਜੀਲੈਂਟ ਫੀਚਰ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਸੰਸਕਰਣ 10.7.3.1 (ਐਜੀਲੈਂਟ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਯਾਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਐਕਸਿਕੋਨ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੀ ਅਨੁਸਾਰੀ GAL ਫਾਈਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਹਰੇਕ ਚਿੱਤਰ ਦੀ ਫਲੋਰਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਲਈ ਮਾਈਕਰੋਏਰੇ ਡੇਟਾ ਐਕਸੈਸ਼ਨ ਨੰਬਰ GPL32397 ਦੇ ਤਹਿਤ GEO ਡੇਟਾਬੇਸ ਵਿੱਚ ਜਮ੍ਹਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਟੌਕਸੋਪਲਾਜ਼ਮਾ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ RH ਜਾਂ ME49 ਤਣਾਅ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗਲੀਆ ਵਿੱਚ ਪਰਿਪੱਕ ਐਕਸੋਸੋਮਲ miRNAs ਦੇ ਸਮੀਕਰਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਾਂ ਦਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਨੈਟਵਰਕ ਟੂਲਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ miRNAs ਦੀ ਪਛਾਣ miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ 8.0 ਤੋਂ ਵੱਧ ਆਮ ਸਿਗਨਲ ਤੀਬਰਤਾ (log2) ਨਾਲ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।miRNAs ਵਿੱਚ, T. gondii ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ RH ਜਾਂ ME49 ਤਣਾਅ ਦੁਆਰਾ ਬਦਲੇ miRNAs ਦੇ ਫਿਲਟਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤੇ ਗਏ miRNAs ਨੂੰ 1.5-ਗੁਣਾ ਤੋਂ ਵੱਧ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਲਿਪੋਫੈਕਟਾਮਾਈਨ 2000 (ਇਨਵੀਟ੍ਰੋਜਨ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, ਸੀਏ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਆਪਟੀ-ਐਮਈਐਮ (ਗਿਬਕੋ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, ਸੀਏ, ਯੂਐਸਏ) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਛੇ-ਖੂਹ ਪਲੇਟਾਂ (3 x 105 ਸੈੱਲ/ਖੂਹ) ਵਿੱਚ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਟਡ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 6 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਤਾਜ਼ੇ ਸੰਪੂਰਨ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ 24 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਕਟਾਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਸੀ।
ਅੰਕੜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਕਸਲ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (Microsoft, Washington, DC, USA) ਦੇ ਨਾਲ ਵਿਦਿਆਰਥੀ ਦੇ ਟੀ-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਪ੍ਰਿਜ਼ਮ 3.0 ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਗ੍ਰਾਫਪੈਡ ਸੌਫਟਵੇਅਰ, ਲਾ ਜੋਲਾ, ਸੀਏ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਦੋ-ਤਰਫ਼ਾ ਅਨੋਵਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪੀ-ਮੁੱਲ <0.05 ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਪੀ-ਮੁੱਲ <0.05 ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। Значения P <0,05 считались статистически значимыми. ਪੀ ਮੁੱਲ <0.05 ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਪੀ 值< 0.05 被认为具有统计学意义. ਪੀ 值 <0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. ਪੀ ਮੁੱਲ <0.05 ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਸਿਓਲ ਨੈਸ਼ਨਲ ਯੂਨੀਵਰਸਿਟੀ ਸਕੂਲ ਆਫ਼ ਮੈਡੀਸਨ (IRB ਨੰਬਰ SNU-150715-2) ਦੇ ਸੰਸਥਾਗਤ ਸਮੀਖਿਆ ਬੋਰਡ ਦੁਆਰਾ ਮਨਜ਼ੂਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
ਫਰਲੇ, ਜੇ. ਐਟ ਅਲ.2018 ਵਿੱਚ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਗਲੋਬਲ ਕੈਂਸਰ ਦੀਆਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਅਤੇ ਮੌਤ ਦਰ: ਗਲੋਬੋਕਨ ਸਰੋਤ ਅਤੇ ਵਿਧੀਆਂ।ਵਿਆਖਿਆ.ਜੇ. ਰਕ 144, 1941–1953 (2019)।
ਰਸ਼ੀਦ, ਐੱਸ., ਰਹਿਮਾਨ, ਕੇ. ਅਤੇ ਆਕਾਸ਼, ਐੱਮ. ਐੱਸ. ਰਸ਼ੀਦ, ਐੱਸ., ਰਹਿਮਾਨ, ਕੇ. ਅਤੇ ਆਕਾਸ਼, ਐੱਮ. ਐੱਸ.ਰਸ਼ੀਦ, ਐਸ., ਰਹਿਮਾਨ, ਕੇ. ਅਤੇ ਆਕਾਸ਼, ਐਮ.ਐਸ. ਰਸ਼ੀਦ, ਐਸ., ਰਹਿਮਾਨ, ਕੇ. ਅਤੇ ਆਕਾਸ਼, ਐਮ.ਐਸ. 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. ਰਸ਼ੀਦ, ਐਸ., ਰਹਿਮਾਨ, ਕੇ. ਅਤੇ ਆਕਾਸ਼, ਐਮ.ਐਸ. ਬ੍ਰੇਨ ਟਿਊਮਰ ਦੇ ਜੋਖਮ ਕਾਰਕਾਂ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਸੰਬੰਧੀ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਦੀ ਡੂੰਘੀ ਸਮਝ।ਰਸ਼ੀਦ, ਐਸ., ਰਹਿਮਾਨ, ਕੇ. ਅਤੇ ਆਕਾਸ਼, ਐਮ.ਐਸ.ਬਾਇਓਮੈਡੀਕਲ ਵਿਗਿਆਨ.ਫਾਰਮਾਸਿਸਟ।143, 112119 (2021)।
ਕਾਟੋ, ਆਈ., ਝਾਂਗ, ਜੇ. ਐਂਡ ਸਨ, ਜੇ. ਮਨੁੱਖੀ ਓਰੋਡਾਈਜੈਸਟਿਵ ਅਤੇ ਮਾਦਾ ਜਣਨ ਟ੍ਰੈਕਟ ਕੈਂਸਰਾਂ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ-ਵਾਇਰਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ: ਮਹਾਂਮਾਰੀ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਸਬੂਤ ਦਾ ਸੰਖੇਪ। ਕਾਟੋ, ਆਈ., ਝਾਂਗ, ਜੇ. ਐਂਡ ਸਨ, ਜੇ. ਮਨੁੱਖੀ ਓਰੋਡਾਈਜੈਸਟਿਵ ਅਤੇ ਮਾਦਾ ਜਣਨ ਟ੍ਰੈਕਟ ਕੈਂਸਰਾਂ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ-ਵਾਇਰਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ: ਮਹਾਂਮਾਰੀ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਸਬੂਤ ਦਾ ਸੰਖੇਪ।ਕਾਟੋ ਆਈ., ਝਾਂਗ ਜੇ. ਅਤੇ ਸਨ ਜੇ. ਮਨੁੱਖੀ ਗੈਸਟਰੋਇੰਟੇਸਟਾਈਨਲ ਟ੍ਰੈਕਟ ਅਤੇ ਮਾਦਾ ਜਣਨ ਟ੍ਰੈਕਟ ਦੇ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ-ਵਾਇਰਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ: ਮਹਾਂਮਾਰੀ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਡੇਟਾ ਦਾ ਸੰਖੇਪ। Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相中的细菌-病毒相互作用：毒相互作用：毒相互作口腔消化道癌 ਕਾਟੋ, ਆਈ., ਝਾਂਗ, ਜੇ. ਐਂਡ ਸਨ, ਜੇ. ਮਨੁੱਖੀ ਮੌਖਿਕ ਗੁਫਾ ਪਾਚਨ ਅਤੇ ਮਾਦਾ ਪ੍ਰਜਨਨ ਟ੍ਰੈਕਟ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਓ-ਵਾਇਰਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ: ਪ੍ਰਸਿੱਧ ਰੋਗ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਸਬੂਤ ਦਾ ਸਾਰ।ਕਾਟੋ ਆਈ., ਝਾਂਗ ਜੇ. ਅਤੇ ਸਨ ਜੇ. ਮਨੁੱਖੀ ਗੈਸਟਰੋਇੰਟੇਸਟਾਈਨਲ ਕੈਂਸਰ ਅਤੇ ਮਾਦਾ ਜਣਨ ਕੈਂਸਰ ਵਿੱਚ ਬੈਕਟੀਰੀਆ-ਵਾਇਰਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ: ਮਹਾਂਮਾਰੀ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਡੇਟਾ ਦਾ ਸੰਖੇਪ।ਕੈਂਸਰ 14, 425 (2022)।
ਮੈਗਨ, ਕੇਐਲ ਅਤੇ ਪੈਰਿਸ਼, ਜੇਐਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਕੈਂਸਰ ਤੱਕ: ਕਿਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਟਿਊਮਰ ਵਾਇਰਸ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲ ਕੇਂਦਰੀ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਲਿਪਿਡ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ। ਮੈਗਨ, ਕੇਐਲ ਅਤੇ ਪੈਰਿਸ਼, ਜੇਐਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਕੈਂਸਰ ਤੱਕ: ਕਿਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਟਿਊਮਰ ਵਾਇਰਸ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲ ਕੇਂਦਰੀ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਲਿਪਿਡ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ।ਮਾਹੋਨ, ਕੇਐਲ ਅਤੇ ਪੈਰਿਸ਼, ਜੇਐਲ ਫਾਇਰ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਟੂ ਕੈਂਸਰ: ਕਿਵੇਂ ਡੀਐਨਏ-ਅਧਾਰਤ ਟਿਊਮਰ ਵਾਇਰਸ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲ ਕੇਂਦਰੀ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਲਿਪਿਡ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ। Magon, KL & Parish, JL 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢. ਮੈਗਨ, ਕੇਐਲ ਅਤੇ ਪੈਰਿਸ਼, ਜੇਐਲ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਕੈਂਸਰ ਤੱਕ: ਕਿਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਟਿਊਮਰ ਵਾਇਰਸ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲ ਕੇਂਦਰੀ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਲਿਪਿਡ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ।ਮਾਹੋਨ, ਕੇਐਲ ਅਤੇ ਪੈਰਿਸ਼, ਜੇਐਲ ਕੈਂਸਰ ਨੂੰ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਅੱਗ ਲਗਾਉਂਦਾ ਹੈ: ਕਿਵੇਂ ਡੀਐਨਏ ਟਿਊਮਰ ਵਾਇਰਸ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਕੇਂਦਰੀ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਲਿਪਿਡ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਬਦਲਦੇ ਹਨ।ਓਪਨ ਬਾਇਓਲੋਜੀ.11, 210004 (2021)।
Correia da Costa, JM et al.ਸਕਿਸਟੋਸੋਮਜ਼ ਅਤੇ ਜਿਗਰ ਦੇ ਫਲੂਕਸ ਅਤੇ ਹੈਲਮਿੰਥ-ਸਬੰਧਤ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਕੈਟੇਕੋਲ ਐਸਟ੍ਰੋਜਨ।ਸਾਹਮਣੇਅੰਦਰ ਗਰਮ.5, 444 (2014)।